Вы здесь

Биотесты на основе ферментных систем для оценки токсического действия ксенобиотиков на объекты ветеринарно-санитарного и экологического контроля

Автор: 
Лавина Светлана Алексеевна
Тип работы: 
Докторская
Год: 
2002
Артикул:
271680
129 грн
(417 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

2
СОДЕРЖАНИЕ
Условные обозначения........................................... 5
Введение..................................................... 6
Часть I. Литературный обзор.............................................. 12
Глава 1. Ферменты, их значение в организме и роль в токсико динамике
ксенобиотиков................................................. 12
Глава 2. Методы определения активности ферментов....................... 17
Глава 3. Влияние токсических веществ на ферменты....................... 20
3.1. Фосфорорганические соединения................................. 21
3.2. Синтетические пиретроиды...................................... 22
3.3. Соединения тяжелых металлов................................... 23
Глава 4. Современные методы изучения механизмов токсического действия ксенобиотиков.................................................... 25
Глава 5. Инфузории ТеиаЪутепа руготня как перспективный тест-организм для оценки состояния объектов ветеринарно-
санитарного и экологического контроля......................... 30
Часть П. Собственные исследования........................................ 34
Глава 1. Материалы и методы исследований............................... 34
Глава 2. Совершенствование и разработка методик определения удельной каталитической активности ферментов в различных биологических материалах................................................. 39
2.1. Разработка методики определения удельной каталитической активности фосфатаз в органах и тканях животных.................... 39
2.2. Разработка методики определения удельной каталитической активности оксидазы в органах и тканях животных......... 41
2.3. Адаптация методик определения удельной каталитической активности ферментов для работы с культурой инфузорий ТейвЬутепа руп!Ьпт$................................................ 43
3
2.3.1. Получение ферментативных препаратов из культуры инфузорий Tetrahyraena pyriformis........................................... 43
2.3.2. Определение удельной каталитической активности 1-нафтилацетатэстеразы в культуре инфузорий Tetrahymena 44
pyriformis..................................................
2.3.3. Определение удельной каталитической активности фосфатаз
в культуре инфузорий Tetrahymena pyriformis..................... 45
2.3.4. Определение удельной каталитической активности оксидазы
в культуре инфузорий Tetrahymena pyriformis..................... 46
Глава 3. Фоновые уровни удельной каталитической активности ферментов в органах высших животных и культуре инфузорий
Т etrahymena pyriformis......................................... 48
Глава 4. Влияние токсикантов на ферментативную активиосгь органов
и тканей высших животных........................................ 52
4.1. Влияние ДЦВФ на ферменты высших животных....................... 52
4.1.1. Влияние ДЦВФ на ферменты in vitro.............................. 52
4.1.2. Влияние ДДВФ на ферментативную активность органов белых
мышей........................................................... 62
4.2. Влияние перметрина на ферменты высших животных................. 82
4.2.1. Влияние перметрина на ферменты в экспериментах in vitro 82
4.2.2. Влияние перметрина на ферментативную активность органов
белых мышей..................................................... 89
4.3. Влияние свинца ацетата на ферменты высших животных 109
4.3.1. Влияние свинца ацетата на ферменты высших животных in 109 vitro.
4.3.2. Анализ токсического действия свинца ацетата в модельных острых опытах на белых мышах................................ 115
4.3.3. Анализ токсического действия свинца ацетата в хронических экспериментах на белых крысах........................................ 132
32
токсичности объектов вегери парно-санитар ного и экологического контроля (Долгов В. А., 1992).
Показана возможность комплексного анализа вод, загрязненных тяжелыми металлами и органическими соединениями, с использованием инфузорий в сочетании со спектратьным анализом, что позволяет дать интегральную оценку качества воды и косвенно определить присутствие органических загрязнителей (Золотарева Н.И. и др., 1991).
Экологическое значение имеет чувствительность тетрахимен к агрохимическим средствам, в частности, к пестицидам. Установлено угнетающее действие на рост инфузорий таких соединений, как 2,4,5-ТХА, хлорорганических пестицидов, фенола (Горошко О.Г., 1987). Использование синхронизированной культуры дает возможность проводить идентификацию пестицидов с наименьшей токсичностью, а также определять токсичность промежуточных продуктов их синтеза (Болдырева Н.М., 1988).
В то же время установлено, что инфузории неодинаково чувствительны к веществам одного и того же класса. К примеру, хлорорганическое соединение тиодан проявляет токсичность в минимальной концентрации 80 мг/мл, для препарата тидео минимальная концентрация значительно выше (Горошко О.Г., 1987).
Результаты экспериментов на тетрахименах часто коррелируют с таковыми на других тест-объектах, в том числе на высших животных (Коромыслов Г.Ф. и др., 1983; Долгов В.А., 1992), что дает возможность рекомендовать использование тетрахимен в пракгике контроля за состояние объектов окружающей среды , продуктов, кормов, ветеринарных препаратов (Долгов В.А., 1992).
Раннее уже отмечалось, что основной тестируемой функцией Т. pyriformis является ростовая реакция, определяемая путем подсчета выросших за определенный период времени клеток под микроскопом в специальных счетных камерах (Горяева, Бюркера, Фукса-Розенталя). Этот принцип положен в основу большинства существующих методов биологической оценки (Игнагьев А.Д., Шаблий В .Я., 1978; Лахонина Г.М. и др., 1991). Предлагается использовать для
33
определения количества клеток инструментальные методы, облегчающие и ускоряющие ход анализа без снижения его точности, достоверности и чувствительности. (Ое Сгедоп А. е! а1., 1973; КаезЩсг НДУ. а а1., 1976).
Долгов В.А. (1992) установил, что важным критерием оценки может быть и поведенческая (хемотаксическая) реакция инфузорий, традиционно относимая к проявлениям жизнедеятельности более высокоорганизованных биологических объектов - насекомых, рыб, теплокровных животных (крыс, собак и др.). Поведенческая реакция этих животных, по сравнению с простейшими, конечно, сложнее и информативнее, тем не менее одноклеточный организм имеет преимущества, заключающиеся в его меньших адаптационных способностях, более высокой скорости реагирования и наглядности этого процесса.
Кроме того, в литературе появляются данные о биохимической реакции инфузорий на токсические вещества. По данным Щпакова А.О. и др. (1997), установлено, что аденилатциклазная система инфузорий является чувствительным зестом на воздействие солей тяжелых металлов. Однако такие данные ограничены, методы получения ферментов из культур клеток и определения активности этих ферментов не отработаны, что говорит о перспективности разработки этого материала.
У'мтывая наличие сходства между высшими животными и Т. ругНоптв в процессах обмена веществ и реакции на воздействие внешних факторов, можно предположить, что и биохимический ответ на поступление токсикантов у инфузорий сходен с таковым у высших животных. Это открывает перспективы возможной экстраполяции данных, получаемых на инфузориях, на высшие организмы, снижения затрат на постановку экспериментов, упрощения и ускоре>шя постановки анализа и получения адекватных результатов.