РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Методи дослідження
Обстеження хворих проводилось у відділенні ендокринної гінекології Інституту педіатрії, акушерства та гінекології АМН України (керівник - д.мед.н. Т.Ф. Татарчук), в гінекологічних відділеннях клінічних лікарень № 9 і 16, у відділі клінічної фізіології і патології опорно-рухового апарату Інституту геронтології АМН України (керівник - д.мед.н., проф. В.В. Поворознюк), у відділі ендокринології репродукції та адаптації Інституту ендокринології та обміну речовин ім.В.П. Комісаренка АМН України (керівник - чл.-кор.НАН та АМН України, д.мед.н., проф. О.Г. Резніков).
Для встановлення діагнозу, формування груп дослідження та контролю ефективності профілактики та лікування жінкам проводили:
- опитування (збір сімейного, соматичного, гінекологічного та нейро-ортопедичного анамнезу);
- бімануальне гінекологічне обстеження;
- цитологічне та кольпоскопічне обстеження;
- нейро-ортопедичне обстеження;
- визначення антропометричних характеристик (зріст, вага, периметр плеча, стегна, ІМТ (індекс маси тіла), обчислення на основі ваги жирової та знежиреної жирової маси тіла за формулами Barter,Forbes,1963:
ЖМ = 0,671 x W - 21,6 (2.1.1)
ЗЖМ = 0,328 x W + 21,7 (2.1.2)
де ЖМ - жирова маса тіла, ЗЖМ - знежирена жирова маса тіла,
W - загальна маса тіла
- ультразвукове обстеження органів малого тазу та молочних залоз (з метою виключення запальних та пухлинних процесів) з використанням апаратів Ultramark 4 (Advanced Technology Laboratories), Picker KS 2400, Sonoace 88P
- білатеральну мамографію перед призначенням замісної гормональної терапі.
На етапі формування груп досліджень всі обстежені пацієнтки проходили загальні клінічно-лабораторні обстеження (включно з проведенням по індивідуальним показам аналізів сироватки крові на Са, Р; загальний холестерин, ?-холестерин, ?-ліпопротеїди; коагулограми, печінкових проб, визначення цукру крові) з метою виключення з контингенту обстежених пацієнток з важкими екстрагенітальними, ендокринними, онкологічними та іншими захворюваннями, які можуть впливати на метаболізм кісткової тканини, а також для визначення протипоказів для призначення замісної гормонотерапії.
Визначення вмісту білкових гонадотропних гормонів - лютропіну (ЛГ), фолітропіну (ФСГ) проводилось імуноферментним методом з використанням наборів NovaPath LH, NovaPath FSH (Bio-Rad Laboratories, Італія) та Microwell LH EIA, Microwell FSH EIA (Syntron, США).
Метод побудований на застосуванні твердофазного ензим-зв'язаного імуносорбентного аналізу, в якому використані два види моноклональних антитіл (перше - кон'юговане з пероксідазою хріну, друге - зв'язане з біотином), які мають високу спорідненість та специфічність по відношенню до визначених антигенних детермінант на молекулі визначаємих гормонів.
В процесі аналізу ці антитіла зв'язуються з відповідним антигеном і утворюють розчинний імунокомплекс, який згодом поєднується з авідіном, розташованим у вигляді твердої фази на стінках лунок. Після відповідної інкубації та промивки лунок від незв'язаних реагентів проводять кольорову реакцію впродовж 10 хвилин за допомогою субстрату (3,3'-5,5'-тетраметілбензідіна), після зупинки якої на імуноферментному аналізаторі Labsystems Multiscan PLUS вимірюють оптичну густину розчинів при довжині хвилі 450 нм. Концентрація відповідного гормону виявляється прямопропорційною інтенсивності офарблюваного зразку.
Визначення вмісту в крові пацієнток статевих стероїдних гормонів (естрадіолу, прогестерону) проводили імуноферментним методом за допомогою наборів Bio-Rad PROGESTERON, NovaPath ESTRADIOL (Bio-Rad Laboratories, Італія).
Метод базується на конкурентному зв'язуванні антигена та кон'югату пероксідази із відповідним гормоном з антигормональними антитілами, розташованими у вигляді твердої фази на стінках лунок. Кольорова реакція та детекція за допомогою імуноферментного аналізатора схожа з вищевикладеною для визначення білкових гормонів.
В лабораторії ендокринології Інституту педіатрії, акушерства і гінекології АМН України (керівник лабораторії - д.мед.н. З.Б. Хомінська) проводилось вивчення клітинного складу піхвового мазку (кольпоцитологія) в залежності від стану епітелія піхви.
Морфологічна характеристика клітин (парабазальних, проміжних та поверхневих) та кількісний аналіз співвідношення клітин (визначення ІЗ - індексу зрілості, тобто процентного співвідношення трьох видів епітеліальних клітин; КІ - каріопікнотичного індексу, який визначає процент поверхневих клітин з пікнотичними ядрами серед загальної кількості клітин та ЕІ - еозинофільного індексу, який детермінує процент поверхневих еозинофільно зафарблених клітин серед їх загальної кількості) свідчать про естрогенну насиченість організму жінки. Для кольпоцитологічного дослідження матеріал отримували шляхом обережного дотику інструментом до бокової стінки піхви (без соскобу слизової оболонки), фіксували та фарбували на предметному склі. В процессі мікроскопічних розрахунків аналізували гормональний гомеостаз та його кореляцію із станом кісткової тканини у жінок з природньою та хірургічною менопаузою [3, 32].
Ступінь атрофічного процесу визначали згідно класифікації М.А. Базарнової (1985) та по балам індексу вагінального здоров'я (таблиця 2.1.1) [3, 32, 67, 93].
Таблиця 2.1.1
Визначення "індексу вагінального здоров'я" (ІВЗ) слизової оболонки
Значення ІВЗ, балиПоказникиеластич-ністьтрансудатрНепітеліальна цілісністьвологість1 (висока ступінь атрофії)відсутня відсутній6,1петехії, кро-воточивістьвиражена сухість поверхні,
запалення2 (виражена атрофія)слабка скудний, поверхневий, жовтий5,6-6,0кровоточи-вість при контактівиражена сухість, запалення3 (помірна атрофія)середня скудний поверхневий, білий5,1-5,5кровот
- Київ+380960830922