Ви є тут

Iнгібітори протеїназ, антиоксиданти та сурфактант у корекції пошкоджень легень при турнікетному шоці

Автор: 
Горохова Наталiя Юрiiвна
Тип роботи: 
Дис. канд. наук
Рік: 
2003
Артикул:
0403U001171
129 грн
Додати в кошик

Вміст

ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика экспериментального материала
Экспериментальные исследования проведены на 181 белых крысах-самцах линии
”Vistar”, массой 180-200 граммов, а так же на 25 кроликах, массой 2700-2900
граммов. Содержание животных в виварии было одинаковым, что является
необходимым условием создания структурной группы [196].
Модель турникетного шока. Турникетный шок моделировали путем наложения
резиновых жгутов на обе задние конечности животных на уровне паховой складки
[197], используя модификацию В.З. Харченко (удостоверение на рационализаторское
предложение № 1786, выданное Крымским государственным медицинским институтом
28.09.89г.). Ширина пережатия тканей составляла 2-3 мм. Показателем
правильности наложения жгута являлось отсутствие отека конечностей и бледность
их окраски. Наложение жгута вызывало резкое повышение двигательной активности
животных: они метались по клеткам, пытались грызть жгуты, конечности. Для
отвлечения животных в клетку помещали деревянные бруски 20 х 20 х 10 см,
которые они грызли в период возбуждения. Выраженное психомоторное возбуждение
животных наблюдалось в течение 20-35 минут, что соответствовало эректильной
фазе шока. Реваскуляризация конечностей была проведена через 6 часов, в этот
период имело место уменьшение двигательной активности животных, угнетение
состояния, заторможенность, позволяющие характеризовать эту фазу как торпидную
[42]. Данный метод моделирования турникетного шока приводил к 90-95% гибели
животных в течение 16-18 часов после реперфузии, что соответствует данным
литературы [106,120].
Выбор модели турникетного шока был обусловлен ее простотой, хорошей
воспроизводимостью, возможностью создавать после 6 часов ишемии достаточно
тяжелую форму шока, а так же высокой частотой возникновения такой патологии в
практике мирного и военного времени.
Сроки изучения постишемических изменений в организме – 6 и 12 часов после
реваскуляризации конечностей – определены на основании данных, полученных на
кафедре патологической физиологии Крымского государственного медицинского
института при многолетних экспериментальных исследованиях шоковых состояний
[42,104,106,107,108]. Результаты проведенных исследований показали, что без
лечения к 6 часам после снятия жгутов по сравнению с другими изучаемыми сроками
у экспериментальных животных практически во всех тканях наблюдаются максимально
выраженные морфофункциональные изменения, характерные для картины “шокового”
органа. К 12 часам после реваскуляризации ранее ишемизированных конечностей без
лечения наблюдается гибель 60-70% экспериментальных животных. Поэтому именно в
эти сроки представлялось наиболее интересным изучение динамики биохимических
показателей и морфологических изменений на фоне патогенетической коррекции.
Температура помещения, где осуществлялись эксперименты, составляла 19-22 С °.
Эксперименты проводились согласно разрешению Ученого Совета Крымского
медицинского института (протокол № 103 от 30.11.77).
Через 6 и 12 часов после реваскуляризации конечностей у животных изучали
биохимические показатели сыворотки крови и бронхоальвеолярного смыва, уровень
поверхностной активности легочных экстрактов, а так же патоморфологические
изменения в легких.
Наложение жгутов у крыс проводили под легким эфирным наркозом, у кроликов с
целью кратковременного обезболивания применяли внутривенное введение тиопентала
натрия. Ранее проведенные исследования показали, что применение легкого
эфирного наркоза не влияет на биохимические показатели сыворотки крови и
бронхоальвеолярного смыва [198]. Кровь для исследований у крыс получали путем
декапитации под эфирным наркозом. У кроликов производили раздельный забор
артериальной и венозной крови из яремной вены и сонной артерии с помощью тонких
пластиковых катетеров, после чего выделяли сыворотку для дальнейшего изучения.
Объем одномоментно забираемой крови у кроликов составлял 3 мл. Забивали
кроликов под эфирным наркозом кровопусканием. Необходимость использования в
эксперименте кроликов наряду с крысами обусловлена возможностью получения у
этих животных бомльшего по сравнению с крысами одномоментного объема крови, что
позволяет исследовать у одного и того же животного поступающую в легкие и
оттекающую из легких кровь и таким образом изучить ингибиторную функцию легких
при турникетном шоке и на фоне коррекции.
Для получения бронхоальвеолярного смыва у крыс после забора крови препарировали
трахею, пересекали ее и вводили в нее катетер, который плотно фиксировали при
помощи мягкого зажима. После выделения комплекса “легкое-сердце” ниже
бифуркации трахеи с помощью лигатуры перевязывали главный бронх правого
легкого, которое потом использовали для морфологических исследований. Левое
легкое пятикратно промывали 5,0 мл нагретого до 37°С физиологического раствора.
Полученный материал центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 минут [101].
Надосадочную жидкость - бронхоальвеолярный смыв (БАС) - использовали для
биохимических исследований.
Введение исследуемых препаратов осуществлялось за 30 мин до снятия жгутов.
Использование препаратов до реваскуляризации конечностей позволяет предупредить
агрессивное воздействие биологически активных веществ, ферментов и метаболитов,
количество которых резко возрастает во всех тканях организма после
реваскуляризации ранее ишемизированных конечностей. Исследования, проведенные
ранее на кафедре патологической физиологии Крымского государственного
медицинского института, показали, что введение препаратов после развития
токсемии не эффективно [42,104,106,107,108].
В качестве ингибитора