РОЗДІЛ 2
ОБ'ЄКТИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Для розв'язання поставлених завдань, мета яких - створення ефективного ректального препарату з ЛЕОБ у вигляді супозиторіїв, необхідним є вивчення властивостей розробляємого лікарського препарату.
При визначенні застосовували загальноприйняті методи органолептичних, фізико-хімічних, технологічних та фармакологічних досліджень, які надають можливість об'єктивної оцінки експериментально одержаних даних на підставі статистично оброблених результатів.
2.1. Об'єкти дослідження
У якості діючої речовини застосовували ліпофільний екстракт обніжжя бджолиного - ЛЕОБ - нову біологічно активну субстанцію, одержану з поліфлорного обніжжя бджолиного (РСТ УССР 1999 - 90).
Ліпофільний екстракт обніжжя бджолиного - являє собою густу мазеподібну масу інтенсивного жовто-оранжевого кольору зі приємним своєрідним запахом. Температура плавлення - (37 ? 0,5) ?С. Добре розчиняється у гексані, ефірі петролейному, хлороформі, 1,4 -діоксані та інших полярних розчинниках з утворенням прозорих розчинів жовтого кольору. Частково розчиняється у ацетоні, пропанолі, поліетиленоксиді 400, нерозчинний у воді.
Для вибору раціональної супозиторної основи застосовували різноманітні основи, їх суміші, а також допоміжні речовини, що виробляються вітчизняною промисловістю та за кордоном і дозволені до застосування у медичній практиці.
Жир твердий кондитерський на основі саломасу пластифікованого тип А (ФС 42-1117-86) - однорідна біла або світло-жовта тверда маса; допускається сіруватий відтінок, із характерним запахом жиру. Температура плавлення не вище 37 ?С, а температура затвердіння не нижче ніж 30 ?С. Кислотне число повинно бути не більше 0,3.
Жир твердий "Unichema International" Іспанія, "Mertrade" Чехія, "Huls" Німеччина, "Karlshamns" Швеція (Вітепсол W-35) (ВФС 42У-36-743-98) Маса воскоподібна крихка або гранули білого або з жовтуватим віддтінком зі слабким специфічним запахом чи без нього. При підігріванні до 45 ?С плавиться з утворенням прозорої безфарбної або жовтуватої рідини. Легко розчиняється у хлороформі, практично нерозчиний у воді. Температура плавлення від 34 до 37 ?С. Йодне число не повинно перевищувати 3,0; а кислотне 0,3.
Моногліцериди дистильовані (МГД) (ТУ 10-04-02-42-89) - моногліцерид вищих жирних кислот. Однорідна маса від білого до кремового кольору з температурою плавлення 64 - 68 ?С. Масова доля ?-?-моногліцеридів не менше 90 %, ?-моногліцеридів не менше 30 %. Йодне число не більше 10,0; кислотне не більше 5,0.
Поліетиленоксид (ПЕО) 1500 (ФС 42-1885-82) - комбінація продуктів полімеризації оксиетилена з водою. Біла, жовтувата або сірувата воскоподібна плотна маса. Легко розчинна у воді, 95 % спирті, хлороформі, практично нерозчинна у ефірі. Температура плавлення 42 - 48 ?С.
Поліетиленоксид (ПЕО) 400 (ФС 42-1242-79) - продукт полімеризації окисиетилена з водою або продукт поліконденсації етіленгліколю. Безкольорова, прозора, в'язка рідина з слабким характерним запахом, гідроскопічна. Змішується з водою, 95 % спиртом у різних співвідношеннях, не змішується з ефіром, рН 5 % водного розчину 5,0 - 7,5.
Віск емульсійний (ТУ 10-04-16-127-89) - однорідна лускоподібна маса або у вигляді стружок від білого до світло кремового кольору з рН 6,0 - 7,0 та температурою плавлення 60 - 75 ?С.
Віск бджолиний (ГОСТ 21179- 90) - тверда, зерниста, крихка при переломі маса жовто-коричневого кольору з слабким запахом меду. Температура плавлення 63 - 65 ?С. Добре сплавляється з жирами, вуглеводами.
Парафін нафтовий твердий (ГОСТ 23683 - 89) - являє собою суміш ненасичених вуглеводів, отриманих у результаті переробки нафти або сланцевої олії. Полупрозора, біла, плотна маса, без запаху та смаку, кристалічної структури. Не розчиняється у воді та спирті, легко розчиняється у ефірі, хлороформі, жирних та ефірних оліях. У розтопленому стані змішується з воском, жирами, спермацетом. Температура плавлення 50 - 57 ?С.
Саломас рафінований дезодорований (ТУ 18-17/22-79) - гідрогенізований жир від білого до світложовтого кольору без смаку та запаху, одержується шляхом гідрогенізації бавовникової або соняшникової олій і наступного очищення. Має температуру плавлення 32 - 34 ?С. Кислотне число не повинно перевищувати 0,2; йодне - 62 - 82 (на 100 г).
Олія маслинова рафінована (ТУ 10-04-11/13-87).
Для вибору антиоксиданту застосовані:
- бутилоксианізол (БОА) (ТУ 6-09-3746-84) - порошок білого кольору, легко комкується, олієподібний на дотик, можливо трохи жовтуватого, розуватого або сіруватого відтінку; легко розчиняється у спирті, ефірі, хлороформі, нерозчинний у воді та кислотах;
- бутилокситолуол (БОТ) - іонол харчовий (ТУ 38-101459-75).
Всі використані у роботі розчинники, реактиви, допоміжні речовини та розчини задовольняли вимогам відповідної АНД.
2.2. Методи дослідження
2.2.1. Фізико-хімічні методи дослідження
Для визначення тотожності ліпофільного екстракту обніжжя бджолиного застосовували наступні реакції:
- з хлороформним розчином сурми хлориду: близько 0,05 г ЛЕОБ розчиняють у 1 мл хлороформу у пробірці з притертою пробкою і додають хлороформний розчин сурми хлориду у кількості 0,5 мл. Спостерігається забарвлення зеленого кольору. Загальна реакція на каротиноїди.
- реакція на токофероли : біля 0,05 г ЛЕОБ розчиняють у пробірці з притертою пробкою і додають 0,2 % розчин кислоти фосфорномолібденової у льодяній кислоті оцтовій у кількості 2 мл. Спостерігається поява інтенсивного забарвлення зеленого кольору.
Методика кількісного визначення суми каротиноїдів ЛЕОБ у перерахунку на ?-каротин
Наважку 0,05 г ЛЕОБ розчиняли у гексані у вимірювальній колбі місткістю 50 мл та доводили об'єм розчину гексаном до позначки. Визначали оптичну густину одержаного розчину на спектрофотометрі типу СФ - 46 у кюветі з товщиною шару 10 мм при довжині хвилі (450 ± 2) нм. Як розчин порівняння використовували гексан.
Паралельно визнача