ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Организация экспериментов
Экспериментальная часть работы выполнена на 450 белых беспородных
крысах-самцах, массой 200-250 г, полученных из опытно-экспериментального
питомника Института Гигиены и Медицинской Экологии, фирма «Феникс» (г. Киев).
Выбор крыс в качестве объекта исследования обусловлен тем, что эти животные
являются удобным экспериментальным материалом при проведении массовых острых и
хронических экспериментов. Эти животные обладают повышенной чувствительностью к
ограничению двигательной активности [318]. Установлена также чувствительность
этих животных к действию ЭМИ различных диапазонов [86, 305, 339].
Для эксперимента отбирали животных одинакового возраста и веса,
характеризующихся средней двигательной активностью в тесте «открытого поля».
Подобный отбор позволил сформировать однородные группы животных с одинаковыми
конституциональными особенностями, однотипно реагирующих на действие различных
факторов.
Предварительно отобранные животные были разделены на 5 групп. К первой и второй
группам относились животные, содержащиеся в обычных условиях вивария. Третью
группу составляли крысы, содержащиеся в условиях гипокинезии (ГК). Животные
четвертой группы подвергались действию ЭМИ КВЧ. Пятую группу составили
животные, находившиеся в условиях ГК и одновременно подвергавшиеся воздействию
ЭМИ КВЧ (ГК+КВЧ).
После 9-тисуточных экспериментальных воздействий животным была введена культура
Micoplasma Hominis, полученная из промывных вод бронхов больных в лаборатории
микробиологии института нефрологии и урологии АМН Украины (г. Киев). Micoplasma
Hominis вводилась по 0,2 мл (концентрация 106 микробных тел в 1 мл) в хвостовую
вену крысам 2-ой (инфицированные, И), 3-ей (ГК+И), 4-ой (КВЧ+И) и 5-ой
(ГК+КВЧ+И) групп. 1-ая группа служила биологическим контролем (К) (табл. 2.1).
Таблица 2.1.
Комбинации воздействий в экспериментальных группах животных
Группа
Экспериментальное воздействие и его продолжительность
Гипокинезия - 9 суток
ЭМИ КВЧ – 9 суток
Заражение – 18 суток
1 (К)
–
–
2 (К+И)
–
–
3 (ГК+И)
+
–
4 (КВЧ+И)
–
+
5 (ГК+КВЧ+И)
+
+
Гипокинезия моделировалась помещением крыс в специальные кассеты из оргстекла,
в которых они находились 20 часов в сутки в течение 9 суток (рис. 2.1).
Ограничение подвижности крыс в клетках-пеналах вызывает стрессовую реакцию,
которая зависит от степени жесткости гипокинезии [133]. В течение 4-х остальных
часов осуществляли кормление и уход за животными, взятие крови.
Рис. 2.1. Пеналы для ограничения подвижности крыс.
Воздействие ЭМИ КВЧ осуществлялось ежедневно по 30 минут на
затылочно-воротниковую область в течение 9 суток эксперимента с помощью
генератора «РАМЕД. Эксперт-01» с длиной волны 7,1 мм, плотностью потока
мощности 0,1 мВт/см2 (рис. 2.2).
Рис. 2.2. Экспериментальное воздействие ЭМИ КВЧ.
Известно, что система крови отличается высокой реактивностью и играет
определяющую роль в адаптационных перестройках функционального состояния
организма, что и определяет ее практически немедленное вовлечение в реакции
организма [71, 319]. Поэтому для определения адаптации организма животных к
различным экспериментальным воздействиям использовали показатели бактерицидных,
гидролитических, энергетических систем нейтрофилов и лимфоцитов,
гемокоагуляции, содержания катехоламинов в эритроцитах, цитокинов в плазме
крови.
Периферическую кровь получали из хвостовой вены до экспериментального
воздействия (1 сутки) и на 3, 5, 7, 9, 23 и 28-ые сутки эксперимента. В
периферической крови цитохимическими методами определяли содержание пероксидазы
(ПО), катионных белков (КБ), липидов, кислой фосфатазы (КФ), протеазы (ПР) в
нейтрофилах; среднюю активность сукцинат- (СДГ) и a-глицерофосфатдегидрогеназ
(a-ГФДГ) в лимфоцитах и нейтрофилах; содержание катехоламинов (КА) в
эритроцитах (Э); лейкоцитарную формулу (ЛФ). Исследование изучаемых показателей
производили микроскопически с использованием микроскопа ERGAVAL (VEB Carl Zeiss
Jena).
На 28-ые сутки животных забивали методом моментальной декапитации. В плазме
крови определяли концентрации фактора некроза опухолей-a (ФНО) [223] и
интерферона-g (ИФН) [285].
Учитывая наличие тесной связи коагуляционных свойств крови с клеточными
элементами неспецифической резистентности [334], а также изменение
свертываемости крови в процессе воспалительной реакции [125], было проведено
исследование показателей системы гемостаза.
В течение эксперимента у животных всех групп исследовали динамику массы тела с
помощью электронных лабораторных весов АД-5 № 729.
Крыс содержали в условиях вивария при температуре 18 – 22оС на стандартном
пищевом рационе. При проведении эксперимента придерживались «Правил проведения
работ с использованием экспериментальных животных».
Объем проведенных исследований представлен в таблице 2.2.
2.2. Экспериментальное воздействие ЭМИ КВЧ
При проведении эксперимента использовали генераторы «Луч. КВЧ – 071»,
изготовленный Центром радиофизических методов диагностики и терапии «РАМЕД» в
Институте технической механики НАНУ, г. Днепропетровск.
Технические характеристики установки:
* - рабочая длина волны - 7,1 мм;
* - плотность потока мощности облучения – 0,1 мВт/см2;
* - частота излучения - 42,3 ГГц;
* - габаритные размеры излучателя, выполненного в виде «точки» - 18 x 23 мм;
* - электропитание аппарата осуществляется от сети переменного тока с
напряжением 220 В и частотой 50 Гц.
Воздействию ЭМИ КВЧ подвергались крысы 4 и 5 групп с 8.00 до 12.00 часов
ежедневно до забора крови по 30 минут на затылочн
- Київ+380960830922