РАЗДЕЛ 2
ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика объектов и материалов исследования
Исследование выполнено на 90 собаках и 27 трупах людей. Эксперименты в рамках поставленных исследовательских задач осуществляли на беспородных собаках-самцах с исходной массой 14-26 кг. Выбор данного вида экспериментальных объектов обусловлен макро- и микроморфологическим сходством лимфатического русла, а также топографией и строением экстраорганных лимфатических сосудов и узлов почек собаки и человека (А.А.Сызганов, 1940; В.Я.Бочаров, 1957; К.Л.Лазарев, 1990). Выполнены четыре серии экспериментальных исследований. В I серии (n=20) животным выполняли стандартную гетеротопическую аутотрансплантацию почки на подвздошные сосуды без хирургического восстановления путей лимфооттока. Во II серии осуществляли пересадку почки с дополнительной хирургической её релимфатизацией посредством имплантации реципиентных "источников" в задний почечный синус НТ (n=30). В III серию экспериментов включены животные, которым наряду с гетеротопической трансплантацией осуществляли хирургическую релимфатизацию почки путём шовного формирования лимфонодуло-венозного анастомоза (ЛНВА) между собственным регионарным лимфатическим узлом НТ и реципиентной клапансодержащей v. circumflexa ilii profunda (n=25). В IV серии была осуществлена комплексная хирургическая релимфатизация гетеротопически пересаженных почек, которая достигалась сочетанным использованием оперативного приёма имплантации и микрошовного ЛНВА, как во II и III сериях экспериментов (n=15). Во всех группах выполняли контрлатеральную нефрэктомию интактной почки. Исследования выполнялись через 1, 5, 15, 30, 60, 120 и 360 суток после пересадки. Отбирали соматически здоровых животных, предпочтительно с короткой шерстью, которых в течение недели выдерживали на карантине в условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. Одновременно животных подвергали дегельминтизации ежедневным вскармливанием 1 таблетки вермокса (0,1 г) или вводя в пищу пиперазина адипинат в дозе 1 мг/кг. Массу животных определяли перед первым исследованием и контролировали через каждые две недели. За 16 часов до оперативного вмешательства и перед проведением любых тестовых проб животных лишали воды и еды. Пробы и исследования in vivo выполняли на базе операционных блоков кафедры оперативной хирургии Донецкого государственного медицинского университета и Отдела экспериментальной хирургии и трансплантологии Института неотложной и восстановительной хирургии АМН Украины. Эксперименты проводили в помещении операционной, где поддерживалась температура в диапазоне 18-22°С, относительная влажность 40-60% и освещённость вне работы с бестеневыми лампами 250 люкс. Для адаптации к обстановке оперблока животных доставляли из вивария за 1-1,5 часа до операции или исследования. Премедикацию и анестезию осуществляли при строгом соблюдении инструкций по гуманному обращению с лабораторными животными в соответствии с Приказом Минздрава "О мерах по дальнейшему совершенствованию организации работы с использованием экспериментальных животных". В раннем послеоперационном периоде все животные в течение двух суток находились под контролем в оперблоке, получая в обязательном порядке: подкожные инъекции 1%-ного раствора промедола по 1 мл 2-3 раза в сутки; внутримышечные инъекции ампициллина по 0,5 г на 0,5%-ном растворе новокаина 4 раза в сутки и, по показаниям, - инфузионную терапию (раствор Рингера, нео-гемодез, полиглюкин) и диуретики (лазикс).
По истечении двух суток при отсутствии констатируемых осложнений животных переводили в виварий на общий режим содержания, продолжая профилактическую антибиотикотерапию ещё в течение 5 дней. Первое исследование проводили через сутки после операции. При малейшем подозрении на инфицирование мочевого тракта и в ряде случаев с профилактической целью оперированным собакам дополнительно скармливали ежедневно по 3-4 таблетки нитроксолина или фуразолидона. Дальнейшие инвазивные исследования, сопряженные со взятием почечной ткани - биопсии, нефрэктомии и трансплантатэктомии выполнялись только в условиях наркоза и с соблюдением правил асептики. Выведение животных из эксперимента (эвтаназию) осуществляли внутривенным введением заведомо летальной дозы (100 мг/кг) тиопентала натрия.
Для топографоанатомических исследований, обоснования и оценки технической воспроизводимости разработанных новых лимфокоррегирующих оперативных приёмов трансплантации почки в организме человека были использованы 32 трупа людей обоих полов, умерших в возрасте от 18 до 55 лет. Исследования выполнялись на базе судебно-медицинской прозектуры на свежих трупах лиц, умерших скоропостижной смертью, в течение 6 часов после её наступления. Осуществлялись также хирургические эксперименты на техническую воспроизводимость новых лимфокоррегирующих оперативных приёмов и инструментов для имплантации; макрометрические исследования и фотодокументирование. Нативный трупный материал при отсутствии экспертных ограничений использовался для указанных целей до аутопсии и/или после тотальной эвисцерации органов по Шору. В последнем случае из каждого тотального органокомплекса брали только двупочечно-сосудисто-мочеточниковый блок с окружающими забрюшинными тканями. На невскрытых же трупах последовательно воспроизводили и технически отрабатывали основные этапы пересадки почечно-лимфатического комплекса на подвздошные сосуды, включая его забор, предтрансплантационную лимфохирургическую обработку, формирование донорско-реципиентных связей и релимфатизацию трансплантата.
2.2. Характеристика методов исследования
2.2.1. Оперативные приёмы и вспомогательные воздействия при трансплантации почки
А) Большинство хирургических экспериментов в рамках поставленных задач осуществлялись с использованием комбинированного (внутривенного и ингаляционного) наркоза с применением миорелаксантов. При продолжительных и заведомо повышенно травматичных вмешательствах на одном объекте, предпочтение отдавали сочетанной