<p>Глава 2<br />МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ<br />2.1. Исходный материал<br /> Исходным материалом, используемым в эксперименте по изучению различий эффектов генов фотопериодической реакции озимой мягкой пшеницы, служил набор специально созданных почти изогенных моногенно доминантных линий по локусам Ppd: Ppd1, Ppd2, Ppd3 в генофоне озимой мягкой пшеницы Мироновская 808. Данный материал получен в лаборатории частной генетики мягких пшениц СГИ [21, 134, 154] и представляет собой удобный модельный объект для изучения влияния отдельных генов [65, 66]. <br /> Генофон сорта Мироновская 808 сильно чувствительный к фотопериоду, соответствует рецессивному генотипу по системе локусов Ppd1-3 [77]. Донором гена Ppd1 служил сорт озимой пшеницы Безостая 1, а двух других, неаллельных ему генов - озимый аналог ярового сорта Triple Dirk - Triple Dirk C. В процессе создания линий осуществлялась программа беккроссов на рецессивную форму в качестве рекуррентного родителя, сопровождаемая отбором гетерозигот для последующих насыщений (более ранние или менее чувствительные к фотопериоду выщепенцы). Контроль гетерозиготности отобранных потомков по конкретному локусу проводился при фенотипическом анализе поколения ВсnІ1. В процессе работы учитывалась обязательность предварительной искусственной яровизации (60 суток), нивелирующей различия генофонов по яровизационной потребности. В результате завершения беккроссной программы был экспериментально закончен процесс создания изогенных линий, получено по всем трем локусам Ppd поколение Вс9 и проведено несколько самоопылений. В дальнейшем проведена генетическая идентификация путем тест кросса линий между собой на аллелизм. Полученный результат дает право констатировать, что моногенно доминантные линии по локусам Ppd1, Ppd2, Ppd3 являются носителями только одного доминантного аллеля по каждому из локусов и эти локусы не аллельны друг другу [154]. Кроме этого, показано отсутствие достоверных различий по комплексу агрономических признаков как между выщепившимися после завершающегося беккросса (Вс9) фоточувствительными сибсами и исходным сортом, так и между четырьмя подлиниями в пределах каждой их трех созданных линий [152, 153], а также полная аналогия спектров их запасных белков глиадина и глютенина таковым сорта Мироновская 808 [152]. Полученные результаты свидетельствуют о достаточно полном восстановлении генофона сорта Мироновская 808 у созданных почти изогенных по локусам Ppd линий при наличии различий степени фоточувствительности вследствие присутствия в их генотипах трех неаллельных друг другу доминантных генов Ppd. <br /> <br />2.2. Методика и условия проведения исследований<br /> Для выполнения данной работы были запланированы следующие эксперименты:<br />1. Изучение продолжительности (скорости) прохождения отдельных этапов органогенеза и интенсивности формирования конуса нарастания у конкретных линий при различной продолжительности фотопериода в условиях фитотрона и в естественных полевых условиях.<br />2. Определение эффектов доминантных аллелей трех генов Ppd на продолжительность периода "всходы - колошение" и уровень развития агрономических признаков.<br />3. Определение границ продолжительности фотопериодов, при которых выявляются эффекты конкретных генов Ppd, с последующим установлением:<br />* продолжительности действия фотоэффекта каждого гена;<br />* времени начала действия фотопериодической реакции конкретных генов.<br /> В естественных полевых условиях осеннего посева растения высевали на выровненном поливном участке ручной сажалкой на десятирядковых делянках длиной 1 м с площадью питания 30 х 5 см2. При весенней высадке проростки моногенно доминантных линий и рецессивной формы после 60-суточной яровизации высаживали в поле с размещением растений аналогично таковому при осеннем посеве (рис. 2.1). <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Рис. 2.1. Размещение растений в полевых условиях<br /> <br /> Для проведения экспериментов в искусственных условиях оранжереи семена моногенно доминантных по локусам Ppd1, Ppd2, Ppd3 линий и исходного сорта проращивали в вермикулите при комнатной температуре. Пятидневные проростки подвергали 60-суточной яровизации в климатической камере КНТ-1 при температуре +2 +4 (С и круглосуточном освещении. После окончания яровизации проростки высаживали в сосуды емкостью 5 л по 10 растений на сосуд и выращивали на светоустановках СУВР-1 (рис. 2.2), обеспечивающих освещенность лампами ДРИ-2000 (20-25 тыс. люкс, световой поток 130-150 вт/м2). Температура воздуха в течение суток колебалась от максимальной 23-25 (С днем до минимальной 15-17 (С ночью. Полив растений проводили ежедневно до полного промокания почвы. Для исключения возможного влияния расположения вариантов (сосудов) относительно источников света (являющегося одновременно определенным источником тепла) проводили периодическую полную рендомизацию сосудов с растениями в пределах каждого отдельного СУВР-а (через каждую неделю с момента высадки растений в сосуды до полного выколашивания растений). Продолжительность освещения на каждой из установок СУВР устанавливалась в зависимости от требований вариантов эксперимента.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Рис. 2.2. Светоустановка СУВР-1 с размещенными на ней сосудами<br /> <br /> 1. С целью изучения особенностей прохождения этапов органогенеза, растения моногенно доминантных линий Ppd1, Ppd2, Ppd3 и исходной рецессивной линии выращивали на удлиненном (16 час) - ДД и укороченном (12 час) - КД - фотопериодах. Морфофизиологический анализ фаз развития растений проводили путем анализа проб растений на стереоскопическом микроскопе МБС-10 по Ф.М. Куперман [70]. Пробы брали в количестве 5 случайных растений через день до наступления колошения (VІІ этап органогенеза). Устанавливали календарное начало соответствующего этапа органогенеза по феноменологии конуса нарастания, а также абсолютную величину</p>
- Київ+380960830922