РАЗДЕЛ 2
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ
Объектами исследования служили представители семейства Myrtaceae, интродуцированные на Южный берег Крыма, произрастающие в арборетуме и парках Никитского ботанического сада, на коллекционно-интродукционном питомнике отдела дендрологии и карантинно-семенном участке "Лавровое". В настоящее время коллекция миртовых в Никитском ботаническом саду представлена 8 видами и 4 морфологическими формами различного географического происхождения.
В условиях открытого грунта произрастают представители Средиземноморской области Голарктического флористического царства - Myrtus communis L. - мирт обыкновенный, Myrtus communis var. microphylla Нort. - мирт обыкновенный форма мелколистная, Myrtus communis var. leucocarpa DC. - мирт обыкновенный форма белоплодная, Myrtus communis var. romana Mill. - мирт обыкновенный форма римская, Myrtus communis var. angustifolia Нort. - мирт обыкновенный форма узколистная; Центральнобразильской области Неотропического флористического царства - Acca sellowiana Berg. (Feijoa Sellowiana Berg) - фейхоа Селлова, Юго-западноавстралийской флористической области - Callistemon pungens DC. - красивотычиночник колючий, Callistemon rugulosus DC. (Callistemon coccineаus P.Mulle.) - красивотычиночник мелкоморщинистый, Северо-восточноавстралийской - Eucalyptus gunnii Hook. f. - эвкалипт Ганна, Eucalyptus niphophila Maiden et Blakely. (Eucalyptus coriaceae A. Gunn. var. alpina F. Muell., Eucalyptus pauciflora var. alpina Ewart.) - эвкалипт снеголюбивый.
В условиях защищенного грунта произрастают представители Центральнобразильской флористической области - Psidium guayava L. - псидиум гуайява, Psidium cattleyanum Sabine. (Psidium littorale Raddi., Psidium variable Berg.) - псидиум Кеттли.
Таксономическую принадлежность определяли по G. Krusman [97,98]. Для сравнительного анализа природно-климатических условий естественных ареалов и места интродукции использовали метод сопоставления ареалов на основе системы ботанико-географического районирования Земли, разработанный С.М.Разумов-ским [99]. Анатомическое строение листа изучали по методу Р.П.Барыкиной [100]. При изучении секреторных вместилищ была использована классификация терпеноидодержащих структур растений, предложенная И.А Денисовой [101]. Фенологические наблюдения велись по методическим указаниям, разработанными И.В Голубевой, Р.В Галушко, А.М. Кормилицыным [102].
Скорость и дружность прорастания семян определяли по формулам И.Г. Строна [103]. E = M1S1 +M2S2 + MmSm / M1+ M 2 + Mm, где Е - средняя скорость прорастания семян (в сутках), М - количество проросших семян за сутки в дни подсчетов, S - сроки прорастания в сутках, m - конечный день подсчетов. D = B/S, где D - дружность прорастания семян, В - окончательная всхожесть семян в %, S - число дней прорастания. Лабораторную всхожесть семян определяли согласно Международным правилам определения качества семян [104]. Семена проращивали на свету, при температуре 26 ?С в чашках Петри на фильтровальной бумаге, увлажненной водопроводной водой.
Семенную продуктивность оценивали по методу Н.В.Цицина [105]. Для определения реальной семенной продуктивности маточников представителей семейства Myrtaceae рассчитывали общее количество семян по формуле Q = 10 qRlks, где Q - общее количество семян маточника; q - количество плодов на одном погонном метре модельной ветви; R - средний радиус округленной проекции кроны; l - длина протяженности зеленой кроны по стволу; k - густота кроны в баллах; s - среднее число семян в одном плоде. Статистическая обработка материала по семенной продуктивности растений проведена методом И.В.Вай-нагий [106].
Химический состав плодов определяли по методу В.В.Арасимовича [107]. Количественное содержание эфирного масла определяли методом возгонки с паром по И.С.Гинзбергу в модификации М.А.Горяева и И.П.Плива [108]. Для разделения эфирных масел применяли газожидкостную хроматографию с использованием кварцевых капиллярных колонок внешним диаметром 0,25 мм с привитой жидкой фазой SE-30. Использовали газовый хроматограф типа 3700 - Москва, детектор - пламенно-ионизационый. Расход водорода - 25 мл/мин, расход воздуха - 250 мл/мин. Входное давление газа-носителя - 0,5 атмосфер, расход газа-носителя через колонку - 0,75 мл/мин, сброс газа-носителя - 30 мл/мин. Размер пробы - 0,06 мкл. Температура испарителя - 200 0С, температура детектора - 220 0С, режим работы термостата - программирование температуры от 50 до 220 0С со скоростью 3 0/мин.
Расчет хроматографических пиков проводили с использованием электронной автоматизированной системы САА-006. Идентификацию компонентов осуществляли по индексам удерживания с помощью компьютерной программы "Идентификация" и специализированного для эфирных масел банка данных по индексам удерживания около 2000 соединений на колонках с двумя разными жидкими фазами, а также с использованием смесей около 200 соединений, входящих в состав различных эфирных масел [109].
Идентификацию фенольных соединений проводили методом высоко эффективной жидкостной хроматографии. В связи с этим была проведены модификации имеющихся методик и предложена последовательная схема выделения веществ фенольной природы.
Подготовка проб для химического анализа. Для проведения химических исследований собирали листья растений в фазе плодоношения. Высушивали на воздухе и отбирали пробы по 100 г. Их измельчали вальцеванием до частиц размером не более 1 мм [110]. Насыпная масса измельченной травы составляла 0,35 -0,40 г/см3. Экстракцию сырья проводили по различным схемам. Первая схема - мацерация 70% этанолом 1:5 с последующей вакуум фильтрацией, концентрированием до водного остатка и реэкстракцией эфиром, этилацетатом [111,112]. Для разделения по классам соединений - вторая схема, использовали метод фракционного экстрагирования [113,114] последовательностью растворителей по мере повышения полярности: петролейный эфир, хлороформ, метанол и вода. Определение экстрактивных веществ д