ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Клинические методы исследования.
Комплексная методика обследования включала в себя тщательный клинический
анализ, нейрофизиологические и биохимические исследования. Состояние вещества
мозга, желудочковой системы, цистернальных пространств оценивалось по данным
магнитно-резонансной томографии.
Клиническое обследование больных проводилось по единой схеме, и содержало: сбор
и оценку жалоб, анамнеза, объективного, лабораторного исследования. При сборе
анамнеза изучались демографические показатели (пол, возраст, профессия, место
жительства), семейный анамнез (цереброваскулярные заболевания, артериальная
гипертония, поражение коронарных артерий), уточнялось отношение больного к
курению, приёму алкогольных напитков. При сборе анамнеза выяснялось, как и
когда началось настоящее заболевание, предполагаемые причины, динамика развития
начальных признаков заболевания, появление новых симптомов до обращения в
клинику.
Наследственность считалась отягощенной, если у ближайших кровных родственников
(родители, родные братья, сестры) больных имелось хотя бы одно из таких
заболеваний, как гипертоническая болезнь, мозговой инсульт, инфаркт миокарда
или стенокардия.
При соматическом обследовании проводилась оценка температуры тела, частоты
дыхания, пульса, величины артериального давления, деятельности сердца,
желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы.
Изучение неврологического статуса включало исследование черепных нервов и
связанных с ними функций, двигательной, координаторной, чувствительной и
вегетативной систем, речи, памяти.
В план обследования также входили дополнительные методы: клинический анализ
крови и мочи, биохимический анализ крови, коагулограмма, липидограмма,
рентгенография органов грудной клетки, шейного отдела позвоночника (по
показаниям). ЭЭГ, РЕГ, УЗДГ, ЭхоКС, МРТ. Все больные были осмотрены смежными
специалистами (терапевт, окулист).
2.2. Биохимические методы исследования.
2.2.1. Исследование липидного спектра крови.
2.2.1.1. Определение концентрации холестерина (ХС).
Для определения концентрации холестерина использовали наборы реактивов фирмы
"Human" (Германия).
Принцип метода. Проводилось ферментативное определение концентрации ХС:
холестеролэстаза катализирует гидролиз эфиров холестерина. Холестеролоксидаза
окисляет образующийся холестерин с образованием перекиси водорода. Фенол и
4-аминоантипирин под действием пероксидазы и перекиси водорода образуют
окрашенные соединения, по интенсивности, окраски которых и судят о концентрации
ХС в сыворотке крови.
Ход определения. В 3 пробирки вносили по 0,1 мл рабочего реагента. В опытную
пробу добавляли 0,01 мл сыворотки, в стандартную пробирку - 0,01мл стандартного
раствора, в холостую пробирку - 0,01 мл дистиллированной воды. Содержимое
пробирок перемешивали и инкубировали 5 мин, при температуре 37° С. Измеряли
оптическую плотность опытной пробы и стандартной против холостой при длине
волны 492-550 нм, в кювете с толщиной слоя 10 мм, на биохимическом
анализаторе"Stat fax" 1904 (США). Расчет производили по формуле:
До - оптическая плотность опытной пробы;
Дс- оптическая плотность стандартной пробы;
5,2 - концентрация холестерина в стандартной пробе, ммоль/л
2.2.1.2 Определение концентрации триглицеридов (ТГ).
Проводили по набору реактивов фирмы "Диакон-ДС" (Россия).
Принцип метода. Липаза катализирует реакцию гидролиза триглицеридов с
образованием жирных кислот и эквимолярного количеств глицерина. Глицерин при
наличии АТФ, гексокиназы и глицерофосфатоксидазы окисляется кислородом воздуха
с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Пероксидаза
катализирует окисление хромогенных субстратов перекисью водорода в присутствии
хлорфенола с образованием окрашенного продукта, интенсивность окраски которого
прямо пропорциональна концентрации триглицеридов (ТГ) в пробе и измеряется
фотометрически при длине волны 500 (480-520) нм.
Ход определения. В 3 пробирки вносили по 1,0 мл рабочего реагента. В опытную
пробу добавляли 0,01 мл сыворотки, в стандартную пробирку - 0,01 мл стандарта,
в холостую пробирку - 0,01 мл дистиллированной воды. Перемешивали, инкубировали
5 минут при температуре 37°С. Измеряли оптическую плотность опытной пробы и
калибровочной против холостой, при длине волны 500 нм в кювете с шириной кюветы
10 мм, на биохимическом анализаторе "Stat fax" 1904 (США). Расчет производили
по формуле:
До - оптическая плотность опытной пробы; ед. опт. пл
Дс - оптическая плотность стандартной пробы; ед. опт. пл.
2,3 - концентрация ТГ в калибраторе, ммоль/л.
2.2.1.3. Определение холестерина липопротеидов высокой плотности (ХСЛПВП).
Проводили по набору реактивов фирмы "Диакон-ДС" (Россия).
Принцип метода. Липопротеиды низкой и очень низкой плотности осаждаются под
действием фосфорно-вольфрамовой кислоты в присутствии ионов магния при
центрифугировании. Фракция ХСЛПВП остается в растворе. Холестерин, содержащийся
в этой фракции, определяют ферментативным методом.
Ход определения Реакция осаждения: в центрифужные пробирки вносили по 0,02 мл
сыворотки, к ним приливали по 0,5 мл осаждающего реагента. Одновременно
аналогичным образом разбавляли калибратор холестерина. Тщательно перемешивали,
выдерживали 10 минут при 4000 об/мин. Супернатант отделяли и определяли
концентрацию холестерина аналогично методу, описанному выше (2.2.1.).
2.2.1.4. Определение холестерина липопротеидов низкой плотности (ХСЛПНП).
Проводили по набору реактивов фирмы "Диакон-ДС" (Россия).
Принцип метода. b - липопротеиды осаждают в сыворотке с помощью гепаринового
реактива. Образующуюся мутность фотометрируют. Калибровку проводят, определяя
- Київ+380960830922