Глава 2
ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования.
Объектом исследования в данной работе был верхний (краниальный) шейный ганглий (ВШГ) кролика и крысы (g. cervicale superius). Выбор ВШГ в качестве объекта исследования с одной стороны определялся поставленными выше задачами, а с другой - такими факторами как относительная простота нервных связей в данном ганглии, наличие в фоновой активности его нейронов ПД, вызываемых активацией различных по организации преганглионарных синаптических входов, а также доступностью ВШГ и возможностью раздражать преганглионарные и отводить ПД от постганглионарных нервов в остром опыте in situ.
ВШГ расположен в верхней части шеи на уровне 2-го и 3-го шейных позвонков и прилегает, как правило, к вентромедиальной поверхности сонной артерии в области ее бифуркации. ВШГ имеет веретенообразную форму (иногда с выраженной перетяжкой посредине). Длина ВШГ кролика варьирует от 4 до 8 мм, крысы - от 1 до 2 мм. По своему анатомическому расположению ВШГ (наряду с добавочным и средним шейными ганглиями) занимает промежуточное положение между пара- и превертебральными симпатическими ганглиями, он хотя и является продолжением пограничного симпатического ствола в краниальном направлении, но не получает преганглионарных волокон от соответствующего сегмента спинного мозга [1]. Преганглионарные волокна поступают в ВШГ только в составе шейного симпатического нерва от спинномозговых нервов С8 и Т1-Т7 [1,159]. Кровоснабжение ганглия осуществляется через веточки глоточной и верхней щитовидной артерий, а венозный отток крови через венулы, впадающие во внутреннюю яремную вену [162].
С функциональной точки зрения ВШГ является более гетерогенным образованием чем паравертебральные ганглии пограничного ствола, так как по сравнению с ними он иннервирует больше органов с различной функциональной принадлежностью (сосуды скелетных мышц и кожи головы и шеи, сосуды головного мозга, слюнные и эндокринные железы, хороидальную и радужную оболочки глаза).
Эффекты в органах головы и шеи, вызываемые раздражением преганглионарных волокон в шейном симпатическом нерве (расширение зрачка, сокращение мигательной перепонки и мышц верхнего века, секреция слюны и другие) известны давно. Ленгли еще в конце 19 века показал, что преганглионарные волокна, иннервирующие различные органы, выходят из различных спинномозговых нервов. Например, волокна, сужающие сосуды уха, выходят через II-V грудные нервы, а пиломоторные преганглионарные волокна - через IV-VII [163]. Иннервация слюнных желез происходит через II-III грудные нервы [1]. По скорости проведения возбуждения в шейном симпатическом нерве Экклз выделял четыре группы преганглионарных волокон со скоростями 15-26, 10-14, 7-10, 1.2-5 м/с [164]. Согласно позднее полученным данным скорость распространения возбуждения в шейном симпатическом нерве ниже: одни авторы выделяют четыре группы волокон со скоростями 11-15, 7-11, 3-7 и менее 3 м/с [165], другие - три группы волокон со средними скоростями проведения 14.8, 7.4 и 1.5 м/с [166]. Было также показано, что на одном нейроне ВШГ преимущественно конвергируют преганглионарные волокна с близкими скоростями проведения [167].
По данным Первеса и соавторов [145, 152] ВШГ крысы содержит в среднем 26000 нейронов, кролика - 41000 нейронов. Нейроны ВШГ, как и другие вегетативные нейроны, мультиполярны, их диаметр варьирует от 15 до 40 мкм. Среднее количество дендритов и их длина у нейронов ВШГ крысы составляет соответственно 8.5 и 1700 мкм, а у кролика - 11.9 и 4100 мкм. Среднее количество преганглионарных волокон, конвергирующих на нейроне ВШГ крысы и кролика, равно соответственно 8.7 и 15.5. Количество нейронов ВШГ, иннервируемых одним преганглионарным волокном (нейронная единица), для крысы в среднем равно 237, а для кролика - 422. Большинство преганглионарных волокон, конвергирующих на нейронах ВШГ, образует синапсы на дендритах (97% от общего количества синапсов у ВШГ крысы и 99% у кролика) [152, 168]. Бауерсом и Зигмондом было показано, что нейроны ВШГ крысы, посылающие свои аксоны во внутренний сонный нерв локализованы в ростральной части ганглия, а нейроны, аксоны которых выходят через наружный сонный нерв - в каудальной [169]. Нейроны, иннервирующие различные органы, также преимущественно локализуются в одной области ВШГ, но выраженных кластеров при этом не образуют [4, 170]. Следует также отметить, что кроме основных нейронов ВШГ содержит так называемые малые интенсивно флуоресцирующие (хромаффинсодержащие) клетки, которые, как предполагается, могут играть роль интернейронов или нейросекреторных клеток, но их количество в ВШГ кролика составляет всего лишь от 300 до 700, что на два порядка меньше количества основных нейронов ганглия [4].
2.2. Условия проведения опытов in situ.
Опыты проводили на самцах кроликов массой 1.5 - 2.0 кг и крысах обоего пола массой 200 - 250 г. Опыты по изучению фоновой активности нейронов ВШГ были проведены на кроликах (7 животных) и крысах (20 животных). Влияние ганглиоблокаторов на проведение возбуждения через ВШГ было изучено на крысах (12 животных).
Животных наркотизировали введением уретана в дозе 1 - 1.2 г/кг массы животного в ушную вену (кролик) или внутрибрюшинно (крыса). В случае необходимости в ходе опыта дополнительно вводили небольшие дозы наркоза (приблизительно 0.1 - 0.2 г/кг массы животного).
Уретан (этиловый эфир карбаминовой кислоты) широко используется в острых опытах на различных животных. Так, например, поиск в системе PubMed с ключевыми словами "urethane and anesthetized" показывает, что в последнее время каждый год публикуется примерно 250-300 работ, в которых в качестве анестетика использовался уретан. Уретан вызывает длительную и стабильную анестезию при минимальном влиянии на вегетативную и сердечно-сосудистую системы, при этом его концентрация в плазме крови равна или несколько превышает 10 мМ [171]. При этих концентрациях не наблюдали блокирования уретаном проведения возбуждения чер