РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал исследования
1. Статистические данные о ВПР и НЗ новорожденных, родившихся в Крыму с 1993 по 2002 гг. и состоянии окружающей среды в Крыму за тот же период времени.
2. Клинико-функциональное обследование 221 женщины (I группа), родивших детей с ВПР и НЗ.
3. Клинико-функциональное обследование 157 беременных (II группа), включённых в группу риска по рождению детей с ВПР и НЗ.
4. Контрольная группа, состоящая из 202 перво- и повторнородящих женщин, родивших здоровых детей.
5. Биоптаты (82), взятые при инвазивных методах пренатальной диагностики.
2.2. Методы исследования
Соответственно целям и задачам данного научного исследования было проведено:
1. Статистический анализ ВПР и НЗ у новорожденных, родившихся в Крыму за 10 лет (с 1993 по 2002 гг.).
При анализе статистического материала изучена частота ВПР и НЗ плода, их нозологические формы, очаговость в регионе, удельный вес в структуре общей заболеваемости, смертности и мертворождаемости.
2. Анализ факторов загрязнения окружающей среды по данным Республиканского комитета по экологии и природным ресурсам, Крымской республиканской СЭС, Госкомгидромета в Крыму за период 1993-2002 гг.
3. Изучен общий, генетический и акушерско-гинекологический анамнез, особенности течения беременности, родов, послеродового периода 221 женщины (I группа), родивших детей с ВПР и НЗ плода, состояние при рождении и ближайшие результаты развития детей с ВПР и НЗ; консервативное лечение и хирургическая коррекция аномалий развития новорожденных; определены факторы риска, влияющие на развитие ВПР и НЗ плода.
4. Проведено клинико-функциональное исследование 157 женщин группы риска по возникновению ВПР и НЗ плода (II группа), сформированной на основании факторов риска, выявленных у женщин I группы. У них проводилась профилактика и пренатальна диагностика ВПР и НЗ.
Все данные соматического, генетического анамнеза матерей и отцов, а также результаты клинико-функциональных методов исследования беременных и новорожденных заносились в специально разработанную индивидуальную карту. Статистическая обработка данных проведена с помощью общепринятых методов описательной статистики, многофакторного дисперсионного анализа, достоверность различий оценивалась на основании критерия Стьюдента [143]. Использовались программы статистического анализа Microsoft Exсel 2002 для Windows XP Professional и "Statistica"Ver.6.0 (производства StatSoft(r)Inc., USA).
Методы пренатальной диагностики включали в себя:
1. Неинвазивные (ультразвуковое исследование, кардиотокография, допплерографическое исследование, определение биофизического профиля плода, определение АФП и ХГЧ в сыворотке крови);
2. Инвазивные (биопсия ворсин хориона, амниоцентез, плацентоцентез, амниоплацентоцентез);
3. Цитогенетические методы (кариотипирование клеток амниотической жидкости и ворсин хориона);
4. Морфологическое исследование ворсин хориона (определение коэффициента дизморфии хориона (КДХ), гистологическое исследование).
1. Неинвазивные методы пренатальной диагностики:
1.1. Ультразвуковое исследование.
Для УЗИ использован аппарат фирмы "Toshiba Sono Layer-LS". Исследование проводилось по общепринятой методике, предложенной А.Н.Стрижаковым и соавт. (1990) [175].
Ультразвуковой скрининг проводился в сроки беременности 16-18 и 22-24 недели согласно Приказу МОЗ Украины № 77 от 14.04.1993. "О состоянии и мерах по дальнейшему развитию медико-генетической службы в Украине" и Приказу МОЗ АР Крыма №344 от 3.07.1996. "Национальная программа "Дети Крыма".
1.2. Кардиотокография.
С помощью кардиотокографии изучалось функциональное состояние плода. В нашей работе мы пользовались аппаратом "РМП-007" с ультразвуковым датчиком и компьютерной обработкой данных с последующей оценкой по шкале W. Fisher (1976) [111].
1.3. Допплерографическое исследование.
При ДГИ беременных использовали аппарат фирмы "Toshiba Sono Layer-LS" и исследовали кровоток в аорте плода, пупочной вене и пупочной артериях, внутренней сонной артерии плода и маточных артериях согласно методикам, описанным А.Н.Стрижаковым и соавт. (1990), М.В. Медведевым и соавт. (1991) [114, 175].
1.4. Определение биофизического профиля плода.
Данный метод оценки функционального состояния плода определялся по бальной системе и c использованием шкалы А.Vintzileos et al. (1987) [111].
1.5. Количественное иммуноферментативное определение альфа- фетопротеина сыворотке крови человека.
Количественное иммуноферментативное определение АФП производилось с помощью набора реагентов "ИФА-АФП" [81] при сроке беременности 14-22 недели. Использовался твердофазный метод иммуноанализа.
1.6. Количественное иммуноферментативное определение хорионического гонадотропина в сыворотке крови человека.
Количественное иммуноферментативное определение ХГЧ производилось путем твердофазного иммуноферментного анализа с помощью набора реагентов "Гонадотропин ИФА-ХГч" [82] при сроке беременности 14-24 недели.
2. Инвазивные методы пренатальной диагностики:
2.1. Трансабдоминальная биопсия ворсин хориона.
Метод применялся для получения ворсин хориона с целью их дальнейшего генетического и гистологического исследований в сроке беременности до 12 недель.
После выбора места для трансабдоминальной биопсии ворсин хориона с помощью УЗИ беременной матки, производили прокол передней брюшной стенки и стенки матки в области прикрепления хориона, который аспирировали с помощью шприца, содержащего питательную среду. Аспират отправляли в лабораторию для исследований.
2.2. Трансабдоминальный амниоцентез.
Метод получения околоплодных вод для лабораторного исследования путем прокола передней брюшной стенки и стенки матки. Применялся при сроках беременности 11-26 недель, после предварительного УЗИ полости матки для выбора