РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для достижения поставленной цели работы нами были выполнены экспериментальные и клинические исследования, при проведении которых перфторан, в виде субмикронной эмульсии, использовался в нативном виде.
Перфторан - емкость 200 мл, в аптечных условиях расфасовывался в более мелкие флаконы по 10 мл в каждом, и хранился в условиях глубокой заморозки (при температуре ниже - 10?С).
При температуре -18?С препарат может храниться 2 года, при температуре +4?С срок хранения составляет 2 недели, при этом разрешается пятикратная разморозка препарата [259].
Перед использованием эмульсию самопроизвольно размораживали, в условиях комнатной температуры (не более +30?С) и встряхивали до однородного состава. Перфторан считался непригодным к применению в случаях: расслоения эмульсии (даже после встряхивания), помутнения эмульсии (до молочного цвета), появления осадка (прозрачные маслянистые капли на дне флакона). Препарат хранился в холодильнике, во время использования закапывался с помощью стерильной пипетки.
2.1. Экспериментальные исследования.
Экспериментальная часть роботы проведена на 45 разнополых кроликах (90 глаз) породы шиншилла, весом 2,5 - 3,0 кг, одного возраста. Животные получали полноценное сбалансированное питание и пребывали в стандартных санитарно-гигиенических условиях вивария ДГМА, соответствующих требованиям "Вимог щодо вивчення загальнотоксичної дії нових фармакологічних засобів" [260].
При выполнении эксперимента исследовано влияние перфторана на итактные ткани глаза и на газовый состав влаги передней камеры;
использованы методы гистоморфологического и клинического контроля за процессами эпителизации и заживления роговицы, после произведенной искусственной травмы.
Первая серия опыта направлена на изучение влияния инстилляций эмульсии перфторан на интактные ткани глаза, определение наличия токсического, аллергического и местного раздражающего действия.
В I группе животных (5 кролей, 10 глаз) изучали возможное токсическое, аллергическое и местное раздражающее действие перфторана на интактные ткани глаза. Инстилляции производились в оба глаза всем животным с постоянным увеличением вводимой дозы по схеме: 1-й день - по 2 капли 2 раза в день, 2-й день - по 2 капли 4 раза в день, 3-й день - по 2 капли 6 раз в день, с 4-го по 14 день - по 2 капли 8 раз в день.
Во II группе животных (10 кролей, 20 глаз) изучали возможность дополнительной оксигенации тканей роговицы, путем использования эмульсии перфторан в виде инстилляций. В правый глаз животного (опытный) закапывали перфторан по 2 капли через каждые 2 часа, в левый глаз (контрольный) инстилляции не производились.
Третья и четвертая серии опыта направлены на изучение влияния инстилляций эмульсии перфторан на процесс эпителизации роговой оболочки и устранение признаков воспаления в условиях различного вида травм.
В III группе животных (10 кролей, 20 глаз) произведена модель непроникающей линейной травмы роговицы [144]. Под местной анестезией раствором 0,25% лидокаина с помощью стерильной инъекционной иглы и скарификатора наносили линейную травму шириной 1 мм от 6 до 12 часов через оптический центр роговицы. Лечение начинали через 1 час после произведенного повреждения: в правый глаз животного (опытный) закапывали перфторан по 2 капли 4 раза в день, в левый глаз (контрольный) физиологический раствор (NaCl) 0,9% по 2 капли 4 раза в день.
В IV группе животных (10 кролей, 20 глаз) произведена поверхностная кератэктомия [147]. После эпибульбарной анестезии 0,25% лидокаином в центре роговицы наносили пометку трепаном диаметром 8 мм с последующим окрашиванием 1% раствором флюоресцеина. Удаление эпителия производили с помощью лезвия и шпателя в пределах окрашенной поверхности. Полученная эрозия была идентична для животных контрольной и опытной групп, имела площадь 50 мм?, круглую форму и располагалась в центре роговицы. Лечение начинали через 1 час после нанесения травмы: в правый глаз животного (опытный) закапывали перфторан по 2 капли 4 раза в день, в левый глаз (контрольный) физиологический раствор (NaCl) 0,9% по 2 капли 4 раза в день.
Пятая серия опыта направлена на изучение противоотечного и восстановительного действия эмульсии перфторан на модели роговичного разреза, применяемого при выполнении ЭЭК с имплантацией ИОЛ. В V группе животных (10 кролей, 20 глаз) травма производилась в условиях глубокого наркоза (1,0 мл 1% раствора тиопентала натрия на 1 кг массы). Глазная щель раскрыта векорасширителем; на верхнюю прямую мышцу - уздечный шов; несквозной разрез роговицы по лимбу от 2 до 10 часов; передняя камера вскрыта лезвием на 12 часах; разрез продлен в обе стороны ножницами до 2 и 10 часов; передняя камера заполнена физиологическим раствором (NaCl) 0,9%, восстановлена, герметизирована непрерывным швом; субконъюнктивально введено 0,3 мл дексаметазона. Роговичный разрез выполнен согласно общепринятой методике, применяемой при проведении операции экстракапсулярной экстракции катаракты [261]. Лечение начинали через 1 час после произведенного повреждения: в правый глаз животного (опытный) закапывали перфторан по 2 капли 4 раза в день; в левый глаз животного (контрольный) - физиологический раствор (NaCl) 0,9% по 2 капли 4 раза в день; в опытной и контрольной группах закапывали макситрол по 2 капли 6 раз в день, на 3-и и 7-е сутки после операции производили парабульбарную инъекцию дексона с гентамицином (0,5 мл).
2.1.1. Клинические методы и критерии оценки состояния животных в эксперименте.
В I серии опыта клинические наблюдения за состоянием животных проводились с момента первого закапывания ежедневно, на протяжении 14 дней. Токсическое действие препарата определяли по наличию изменений общего состояния и поведения животных, для этого