РАЗДЕЛ 2
ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объект исследования – телята красной степной породы и поросята полтавской
мясной породы (ПМ-1), выращиваемые по общепринятой технологии в ЗАТ
“Октябрьское”, с. Александровка Красногвардейского района АР Крым. Телят
содержали в индивидуальных клетках в течение молозивного периода, а затем по
группам (10-15 голов) в отдельных загонах. Поросят в течение первых 20 суток
жизни содержали в стандартных клетках вместе со свиноматками в типовых
свинарниках.
При отборе животных определяли их живую массу. Для морфологических исследований
органов лимфоцитопоэза (ЛУ) проводили убой, методом острого обескровливания:
суточных с высокой живой массой – І группа, с низкой живой массой – ІІ группа,
а также 5, 10, 20 суточных (табл. 2.1). Всего – 30 голов (по n = 3).
Морфологические исследования проводили на базе проблемной
научно-производственной лаборатории ветеринарной неонатологии кафедры анатомии
и физиологии животных Южного филиала “Крымский агротехнологический университет”
Национального аграрного университета.
Таблица 2.1
Группы и живая масса телят и поросят, M±m
Телята
Поросята
возраст, сутки
живая масса, кг
V, %
возраст, сутки
живая масса, г
V,%
33,67±0,35
1,47
1276,67±131,59
14,53
ІІ
26,33±0,35
1,87
ІІ
820,00±22,61
3,89
34,37±1,67
6,85
1347,50±23,74
2,48
10
35,86±3,64
14,31
10
2332,50±390,53
23,60
20
42,17±0,97
3,24
20
3306,67±106,37
4,54
После убоя животных путем анатомического препарирования отбирали материал для
исследования: соматические лимфатические узлы у телят и поросят – поверхностный
шейный, подподвздошный; висцеральные – у телят каудальный средостенный и слепой
кишки, у поросят – краниальный средостенный и подвздошно-ободочнокишечный
(табл. 2.2).
Таблица 2.2
Материал исследования
Лимфатический узел
Возраст, сутки
Всего
10
20
Телята
Поверхностный шейный
12
30
Подподвздошный
12
30
Каудальный средостенный
15
Слепой кишки
15
Поросята
Поверхностный шейный
12
30
Подподвздошный
12
30
Краниальный средостенный
15
Подвздошно-ободочнокишечный
15
Итого
72
36
36
36
180
После отбора ЛУ определяли их абсолютную массу (на электронных весах ВЛКТ –
500М), а также линейные промеры (длину, ширину, толщину), при помощи
штангенциркуля и сантиметровой линейки с ценой деления 1 мм. Дополнительно, на
трупах животных, проводили наливку КС соматических и висцеральных узлов черной
тушью на 3% растворе желатина. Контрастную массу вводили у телят в КС
соматических узлов через поверхностную шейную и окружную глубокую подвздошную
артерии, в висцеральные – через кишечные артерии или грудную аорту. Наливку КС
ЛУ поросят проводили через общую сонную артерию или грудную (брюшную) аорту.
Органы фиксировали сначала в 5,0% растворе формалина, хранили при t = 4єС в
течении 2-5 суток, а затем в 10,0% растворе, где хранили на протяжении всего
периода исследований.
Качественные и количественные характеристики тканевых компонентов ЛУ определяли
при исследовании тотальных гистотопограмм (25-30мкм), приготовленных на
микротом – криостате МК-25М по методике П.Н. Гаврилина [256]. Предварительно ЛУ
рассекали на пластинки (толщиной около 5мм) перпендикулярно воротам, промывали
в проточной воде. Полученные гистотопограммы окрашивали гематоксилином и
эозином, резорцин-фуксином (Г.А. Меркулов [258,259]), а также импрегнировали
азотнокислым серебром по В.В. Куприянову [259] (табл. 2.3).
Таблица 2.3
Распределение материала по методикам исследования
Лимфатические узлы
Методики
анатомическое препарирование
наливка тушью сосудов
морфометрия
гистологические
гематоксилин-эозин
фукселин
импрегнация серебром
Телята
Поверхностный шейный
30
30
15
Подподвздошный
30
30
15
Каудальный средостенный
15
15
15
Слепой кишки
15
15
15
Поросята
Поверхностный шейный
30
30
15
Подподвздошный
30
30
15
Краниальный средостенный
15
15
15
Подвздошно-ободочнокишечный
15
15
15
Итого
180
40
180
120
40
40
Исследования гистопограмм проводили при помощи стереоскопического микроскопа
(МБС-10) (окуляр 8, объектив 2, 4, 7) и светового микроскопа “Биолам – ЛОМО” с
бинокулярной насадкой АУ-12У42. Определяли поперечник КС при помощи окуляр –
микрометра МОВ-1-15*. Количественный анализ структурных компонентов
осуществляли по методике “точечного счета”, с использованием окулярных тестовых
систем (вставок) [260, 261].
Определение относительной площади (ОП) тканевых компонентов и КС проводили
путем дифференцированного подсчета точек и вычисляли по формуле:
Vvi = Pi / Pt · 100%,
где: Vvi – относительное содержание структуры в объеме органа, %;
Pi – число точек, попавших на структуру, шт;
Pt – общее количество точек тестовой системы, попавших на гистопрепарат, шт.
В ЛУ определяли ОП КС (артерий, вен, микроциркуляторного русла), капсулы,
корковой, мозговой зон, диффузной лимфоидной ткани, ЛУЗ, трабекул, ворот,
поперечника КС, структуру стенки. Определяли вариабельность (V) показателей.
Статистическую обработку цифрового материала проводили при помощи персонального
компьютера IBM Celeron 466 с использованием стандартных программных пакетов MS
Excell и Statsf SF for Windows 98. Статистически достоверной считали разницу в
показателях *р < 0,05, **р < 0,01, ***р < 0,001. Тотальные гистотопограмм и их
отдельные участки фотографировали на цветную и черно-белую пленку фотоаппаратом
“Зоркий-4” и фото-приставкой к микроскопу МБИ
- Київ+380960830922