ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для достижения поставленной цели и решения задач была разработана программа исследований, предусматривающая 5 этапов (рис. 2.1). Перед началом обследования все пациентки были информированы о характере клинического исследования, о применяемых препаратах и возможных побочных эффектах. Исследования проводились после получения согласия на участие в них и с учетом данных тестирования по разработанной анкете при сопоставлении результатов исследования пациенток группы риска по гестационному поражению почек и здоровых пациенток. Исследования проведены на базе Донецкого регионального центра охраны материнства и детства, ГКБ № 6, № 7.
Для выполнения первого этапа проведен ретроспективный анализ 800 карт беременных, историй родов матерей и историй развития новорожденных от матерей с гестационным поражением почек.
На втором этапе проведено комплексное обследование 144 беременных с гестационным поражением почек и 20 здоровых беременных.
Обследование беременных проводилось согласно приказам МЗ Украины № 503 от 28.12.2002 г. и № 620 от 29.12.2004 г. в I, II и III триместре (12, 27, 38 недель). Новорожденные были под наблюдением в течение года (изучалась их оценка по шкале Апгар, антропометрические данные).
Радио-иммунологические и иммунологические исследования проводились в Центральной научно-исследовательской лаборатории ДонГМУ им. М. Горького (руководитель - профессор Прилуцкий А.С., д.мед.н. Зяблицев С.В.).
У обследуемых пациенток кровь для исследования забирали с 9 до 11 часов утра из локтевой вены натощак в объеме 10 мл, стерильно. Перед взятием крови у обследуемых ограничивали прием кофе, крепкого чая, бананов, сыра, шоколада (в течение 2-х суток), а также некоторых медикаментов (аспирина,
Рис. 2.1. Этапы программы исследования
салицилатов, тетрациклина, ампициллина, эритромицина, хинин-содержащих препаратов) - по возможности, в течение 8 суток.
Исследование уровня гормонов в сыворотке крови выполнено радиоиммунологическим методом с помощью готовых коммерческих наборов фирмы "SEA-IRE-Soring" (Франция) по прилагаемым инструкциям. Этими же методами проводили обследование на TORCH и урогенитальную инфекцию.
В сыворотке крови при помощи иммуноферментного анализа определяли кортизол, эстриол, эстрадиол, плацентарный лактоген, прогестерон, а также ИЛ-6 и ИЛ-8.
Состояние гуморального звена иммунитета оценивали на основании содержания иммуноглобулинов (Ig) классов А, М, G в сыворотке крови методом радиарной иммунодиффузии по G. Manqhini et al. [53]. При проведении исследований использовались коммерческие тест-системы фирм "ROCHE" (Швейцария), "Bio-RAD" (Франция), "BioTechnic" (США), "Genesis Diagnostics" (Великобритания).
В сыворотке крови определяли электролиты К, Na, Ca при помощи анализатора "Media" (США).
У всех обследованных пациенток производили бактериоскопическое исследование материала из влагалища, плаценты, прямой кишки, полости рта, полости носа, зева, конъюнктивы, плацент, а также мочи. Посевы материала для культивирования анаэробов производились на кровяной агар, который в качестве основы содержал агар-Д или эритрит-агар и обогащен гемином, гемолизированной лошадиной кровью. Идентификация анаэробных бактерий была основана на изучении морфологических, культуральных, биохимических признаков, а также на определении спектра летучих жирных кислот методом газожидкостной хроматографии.
Культивирование чистообразующих анаэробов осуществлялось на плотных питательных средах в анаэростатах, заполненных газовой смесью, состоящей из 80% азота, 10% водорода и 10% углекислого газа. Учет и оценку полученных результатов начинали с просмотра мазков из нативного материала, окраску выполняли по методу Грама. При микроскопии учитывали все морфологические формы, грам-принадлежность и тип фагоцитоза к присутствующим микроорганизмам. Из выросших в бескислородной атмосфере колоний производили посев на способность роста в анаэробных условиях. При положительном результате данную культуру рассматривали как факультативный анаэроб, а при отсутствии роста - как строгий анаэроб.
Методом сбора мочи для выявления бактериурии было получение ее при мочеиспускании с обязательным соблюдением стандартных требований, с учетом их ключевой значимости для получения образцов мочи адекватного качества:
* рекомендовали умеренное ограничение приема жидкости накануне вечером с целью дополнительного увеличения концентрации мочи;
* обязателен был предварительный двух- или трехкратный тщательный туалет периуретральной зоны и вульвы моющим средством с теплой водой при последующем высушивании стерильным тампоном; для устранения возможного воздействия на уровень бактериурии, при туалете не допускалось использование дезинфицирующих средств;
* сбор мочи производился при первом утреннем (после пробуждения) мочеиспускании, при этом достигалось устранение эффекта разведения мочи в ходе водной нагрузки в течение дня, что обеспечивало получение для анализа образцов с максимальной концентрацией бактерий;
* для анализа собиралась средняя порция мочи; для реального соблюдения этого требования пациентка перед мочеиспусканием должна была испытывать ощущение наполненного мочевого пузыря; при этом первая порция мочи, промывающая уретру, выпускалась в унитаз, средняя порция без прерывания мочеиспускания собиралась в стерильную лабораторную посуду, оставшаяся моча также выпускалась в унитаз;
* в поздних сроках беременности некоторые (особенно тучные) женщины могут испытывать затруднения при сборе мочи; в таких случаях для обеспечения соблюдения перечисленных выше требований к получению образцов мочи требовалась помощь среднего медицинского персонала.
В течение 10-15 минут моча доставлялась в лабораторию, поскольку важной для оценки бактериурии является максимально быстрая транспортировка полученных образцов в лабораторию. Это требование обосновывается высокой спосо