Ви є тут

Імунореактивність поросят різного віку при пероральному і парентеральному методах імунізації проти сальмонельозу

Автор: 
Рубленко Ірина Олександрівна
Тип роботи: 
Дис. канд. наук
Рік: 
2007
Артикул:
0407U002603
129 грн
Додати в кошик

Вміст

РОЗДІЛ 2
ВИБІР НАПРЯМІВ ДОСЛІДЖЕНЬ, МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
ВИКОНАННЯ РОБОТИ

2.1. Вибір напрямів дослідження
Аналіз літературних даних показав, що захворювання свиней сальмонельозом має значне поширення, зумовлене недостатньою імунною відповіддю при парентеральному введенні сальмонельозної вакцини. Ефективність імунізації залежить не лише від дози і якості антигену, а й від методу його введення. Сучасні дані про тропізм сальмонел до клітин епітелію кишечнику та місцевий імунітет підтверджують необхідність вивчення проведення імунізації пероральним методом введення антигену [176]. Кишечник є одним із важливих органів імунітету, оскільки половина всіх лімфоцитів організму, в тому числі Т- і В-лімфоцитів, локалізується в Lamina propria. Близько 10% лімфоцитів знаходиться в міжепітеліальному просторі, тому при пероральній імунізації відбувається активація субепітеліальної лімфоїдної тканини [10, 122].
У той же час пероральний метод імунізації досі не впроваджений у виробництво, тому що немає обґрунтованих даних імунної відповіді організму на пероральне введення сальмонельозного антигену.

2.2. Об'єкти дослідження, місце проведення досліджень
Дисертаційна робота виконана протягом 2000-2006рр. на кафедрі лабораторної діагностики інфекційних хвороб сільськогосподарських тварин Білоцерківського державного аграрного університету та в агрофірмі "Матюші" Білоцерківського району Київської області.
Агрофірма "Матюші" - багатогалузеве господарство. Із тваринницьких галузей розвинуті скотарство та свинарство. Основний напрямок свинарської галузі - вирощування племінного молодняку великої білої породи. Упродовж 2001-2005 рр. на свинофермі утримувалось від 1070 до 1988 свиней, із них 90 голів основних свиноматок. На одну свиноматку отримано поросят від 12,9 до 17 голів. Збереженість молодняку - 97-98%.
Визначення особливостей імунної відповіді поросят на пероральне введення сальмонельозного антигену в різному віці після народження проводили за схемою досліду. Всі роботи виконувалися відповідно до "Загальних етичних принципів експериментів на тваринах" [201].
У роботі було три серії дослідів. У першій визначали розподіл сальмонельозного антигену в організмі поросят при пероральному і парентеральному методах його введення та морфологічні зміни в лімфоїдній тканині кишечнику, брижових лімфатичних вузлах. У другій вивчали показники імунореактивності поросят, перорально імунізованих сальмонельозним антигеном та біофабричною вакциною. У третій визначали стан напруженості імунітету в поросят, імунізованих сальмонельозним антигеном.

2.3. Методика визначення розподілу сальмонельозного антигену в організмі поросят
Принцип методу. Культури бактерії з поживного середовища активно засвоюють радіоактивні амінокислоти, які надходять у білки мікробної клітини. Неорганічний сульфат перетворюється бактеріями в органічні форми сірки, переважно сірковмісні амінокислоти, а також використовується для побудови білків бактеріальної клітини. Неорганічний фосфор входить як у фосфоліпіди, так і в нуклеїнові кислоти бактерій.
Постановка реакції. У напіврідкий поживний агар вносили радіоактивну мітку 32Р з розрахунку 200 кБк/мл середовища, розливали його у 10 бактеріологічних чашок. Після затвердіння агару висівали культуру Saml. choleraesuis. Культивували у термостаті при 37?С протягом 48 год. Потім культуру змивали стерильним ізотонічним розчином натрій хлориду (з розрахунку 5 мл на 1 чашку) і за оптичною щільністю визначали концентрацію мікробних клітин.
Схема досліду з вивчення вікової імунореактивності поросят, імунізованих сальмонельозним антигеном у різному віці після народження

Свиноматки невакциновані, n=9 Свиноматки, вакциновані сальмонельозним антигеном у період супоросності, n=9 v v
П о р о с я т а v v v v
Перорально
імунізовані * Парентерально імунізовані * Перорально
імунізовані *

Парентерально імунізовані *v v v v v v v v v v v v
10-доб. віку, n=7 20-доб. віку, n=7 30-доб. віку, n=7 10-доб. віку, n=7 20-доб. віку, n=7 30-доб. віку,
n=710-доб. віку,
n=7 20-доб. віку, n=730-доб. віку,
n=710-доб. віку,
n=720-доб. віку,
n=730-доб. віку,
n=7 v v v v v v v v v v v v
У дослідних тварин до імунізації, а потім через 14 діб після імунізації і 14 діб та
1 міс. після реімунізації визначали показники:
Клінічний статус <

<

<

< >

>

>

>Розподіл сальмонельозного антигену та реакція організму на його введення Вміст лейкоцитів і лейкограма Титр антитіл у сироватці крові і копрофільтратах Абсолютну кількість Т- і В-лімфоцитів БАС і ЛАС ІМЛ і показники ОФР Превентивні властивості сироватки крові Примітка: * - до кожної дослідної підгрупи було взято по одній контрольній із n=6.
Для відокремлення незв'язаної радіоактивної мітки мікробну культуру багаторазово відмивали ізотонічним розчином натрій хлориду з наступним центрифугуванням при 1000 об/хв, процедуру повторювали 17 разів. Осад розчиняли ізотонічним розчином натрію хлориду до концентрації - 40 млрд м. к. в 1 мл, а потім 1 мл розчину переносили на міліпористий фільтр, який висушували при кімнатні температу