Ви є тут

Зміни ліпідного складу, вмісту продуктів переокиснення компонентів плазматичних мембран кардіоміоцитів і формених елементів крові за умов експериментальної гіперхолестеринемії та стресу і можливості їх фармакологічної корекції

Автор: 
Василинчук Наталія Миколаївна
Тип роботи: 
Дис. канд. наук
Рік: 
2007
Артикул:
0407U002948
129 грн
Додати в кошик

Вміст

РАЗДЕЛ 2.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Экспериментальные модели, использованные в работе
Экспериментальные исследования проведены на беспородных кроликах массой тела 2,8-3,0 кг, которые находились на обычном рационе питания и содержания вивария.
В работе использованы следующие экспериментальные модели:
1) гиперхолестеринемия (ГХЕ);
2) болевой стресс;
3) сочетанное воздействие ГХЕ и длительного стресса.
Экспериментальная модель гиперхолестеринемии.
В течение двух месяцев ежедневно подопытным животным скармливали взвесь холестерина из рассчета 0,5 г/кг, в 10 % растворе растительного масла. Контрольную группу составили интактные животные. На протяжении эксперимента еженедельно у животных брали кровь из краевой вены уха для определения содержания холестерина и триглицеридов в сыворотке крови. Для исследования брались кроли, у которых уровень холестерина в сыворотке крови составил не менее 15 ммоль/л Животные, устойчивые к введению холестерина, так называемые "нуллеры", из опыта исключались через неделю. Забой животных осуществляли через сутки после последнего кормления взвесью холестерина.
Макроскопическое и микроскопическое исследование интимы грудной аорты и коронарных сосудов подопытных животных показало наличие атеросклеротических изменений в виде липидных пятен и полос желтоватого цвета, а в области брюшной аорты наряду с этим - отдельные участки беловатых, незначительно возвышающихся над поверхностью интимы пятна различной толщины, в некоторых местах сливающиеся друг с другом. Атеросклеротические бляшки, ограничивающие просвет аорты или других сосудов подопытных животных, отсутствовали.

Экспериментальная модель болевого стресса.
Использовали болевое раздражение с помощью электрического тока. При отработке данной экспериментальной модели у экспериментальных животных (совместно с ведущим научным сотрудником отдела биохимии, д.м.н. Орловой Н.Н.) мы исходили из классических исследований школы O.Desiderato [246] и Ф.З. Меерсона [247], предложивших и успешно использовавших с этой целью эмоционально-болевое раздражение с помощью электрического тока. Согласно данным литературы, при изучении стрессорных воздействий основным объектом исследования служили мелкие лабораторные животные - крысы, мыши, морские свинки. Наша работа потребовала создания и изготовления специальной клетки в комплексе с устройством для электрического раздражения более крупных животных (кролей). Была сконструирована специальная металлическая клетка, на дно которой через случайные промежутки времени подавали импульсы электрического тока силой до 5 мА.
Отрабатывая режим стрессорных воздействий, мы стремились получить модель стресса с замедленным развитием долговременной адаптации, т.е. воспроизвести стадию перехода от начальной фазы тревоги к долговременной адаптации, при которой сочетались бы проявления неблагоприятных эффектов стресса и активации компенсаторных механизмов [248,249]. С этой целью сеансы электро-болевого раздражения проводились с неправильно чередующимися промежутками времени - от одних до трех суток. Длительность каждого сеанса составляла в среднем 1 час при общем количестве сеансов, равном 8-9. В пределах каждого сеанса схема электроболевого раздражения была подобрана эмпирически и слагалась из случайно чередующихся различных по продолжительности периодов электрораздражения. Промежутки между раздражениями занимали от 10 секунд до 3 минут. Продолжительность электрораздражений колебалась от 4 до 20 секунд. Использовали источник напряжения с максимальным выходным напряжением 55 В, обеспечивающий импульсы постоянного тока силой от 5 до30 mА заданной длительности.
Воспомогательным ориентиром эффективности стрессорного воздействия были поведенческие реакции животных (беспокойство, двигательная активность). Основным критерием воспроизведения стресса служили изменения концентрации в плазме крови 11-оксикортикостероидов [250,251]. В наших исследованиях было показано, что у интактных животных до воспроизведения стресса уровень 11-оксикортикостероидов плазмы крови составлял в среднем 15,4?1,9 мкг/100 мл, а стрессорное воздействие приводило к увеличению этого показателя до 50,4?4,7 мкг/100 мл, т.е. практически в 3 раза. При этом исходили из данных о том, что отчетливым повреждающим эффектом обладал однократный стресс, воспроизводимый у животных в сходных условиях в течение 6 ч и обусловливавший увеличение содержания кортикостерона в крови в 3-4 раза. На этом основании использованное нами острое воздействие отнесено к стрессу умеренной выраженности и продолжительности. Длительный (хронический) стресс воспроизводили в течение 2 нед., причем режим острого стрессорного воздействия подбирали так, чтобы замедлить течение долговременной адаптации (стадии резистентности по Селье).
Экспериментальная модель сочетанного воздействия ГХЕ с длительным стрессорным воздействием.
У животных с длительной алиментарной гиперхолестеринемией через 6 недель от начала нагрузки холестерином присоединяли стрессорные воздействия, которые продолжались в течение двух недель. Для моделирования стресса были использованы вышеописанные эмоционально-болевые раздражения с помощью электрического тока при помещении животных в специальную клетку. Режим болевых раздражений с помощью электрического тока был отработан таким образом, чтобы получить модель хронического стресса с замедленным развитием долговременной адаптации, т.е. воспроизвести стадию перехода от фазы тревоги с начальными элементами повреждения к фазе резистентности. Разработанная модель включала 8 сеансов электро-болевого раздражения, которые были разделены случайно чередующимися промежутками времени - от одних до трех суток. Продолжительность каждого сеанса составляла 1 час, в пределах которого эмпирически подобранный режим электроболевого раздражения слагался из неправильно чередующихся периодов электровоздействия и отдыха. Длительнос