РАЗДЕЛ 2
ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследовали морфогенез тканевых компонентов стенки желудка и его иммунных
структур у поросят новорожденного периода полтавской мясной породы (ПМ-1).
Поросят совместно со свиноматками содержали по общепринятой технологии в
условиях племенной свинофермы учебно-научно-производственного комплекса Южного
филиала «Крымский агротехнологический университет» Национального аграрного
университета.
Для исследования отбирали суточных (в соответствии с показателями массы тела и
статей тела, разделили на три группы), а также 5-, 10- и 20-суточных поросят
(табл. 2.1). Всего исследовано 30 животных (по n=5).
Морфометрию желудка осуществляли соответственно схеме при помощи
штангенциркуля (ГОСТ 166-63), мерной ленты и сантиметровой линейки (ГОСТ
17435-72) (рис. 2.1).
Для исследования ЛС желудка поросят использовали внутритканевую инъекцию
лимфатических капилляров и ЛС черной тушью на 3% водном растворе желатина и
импрегнацию внутриорганного лимфатического русла по Ранвье [276], с последующим
препарированием, изготовлением тотальных просветленных препаратов.
Морфометрию лимфангионов проводили с помощью МБС-10 со стандартными окулярными
вставками [277] .
Объем лимфангионов вычисляли по формуле (А.В. Борисов, 1984; цитируется по В.Ю.
Чумакову [278]): V=Ш2 ·Д/2, где V – объем лимфангиона; Ш – ширина лимфангиона;
Д – длина лимфангиона.
КИ вычисляли по формуле (В.Ю. Чумаков [278]): КИ=К/Д, где К – общее количество
клапанов; Д – длина сосуда в мм.
Для гистологических исследований отбирали участки стенки желудка кардиальной,
пилорической частей, дна и малой кривизны (табл. 2.2; 2.3).
Таблица 2.1
Динамика массы тела и линейных параметров некоторых статей тела поросят
Показатели
Возраст
(сутки),
группа
Масса тела,
Cv,
Высота в холке, мм
Cv,
Обхват груди за лопатками, мм
Cv,
Длина головы, мм
Cv,
Длина туловища, мм
Cv,
Длина хвоста,
мм
Cv,
1454,00±
46,54
7,15
199,80±
3,66
4,10
235,20±
3,81
3,62
107,80±
2,59
5,38
269,00±
5,62
4,67
90,00±
2,48
6,18
ІІ
1144,00±
45,01**
8,79
191,40±
2,73
3,19
222,20±
5,00*
5,03
102,60±
2,18
4,75
246,80±
6,28*
5,69
84,80±
4,39
11,59
ІІІ
812,00±
18,50**
5,10
168,80±
2,33**
3,08
197,20±
4,91*
5,57
100,20±
2,97
6,63
217,00±
3,39**
3,49
71,80±
1,42*
4,44
1926,00±
147,09***
17,07
202,20±
5,56**
6,15
241,60±
4,36**
4,21
114,8±
3,44*
6,70
278,20±
6,43***
5,79
82,80±
4,17
11,27
10
2934,00±
237,58*
18,10
227,80±
9,40
9,23
262,80±
12,84
10,93
120,20±
3,56
6,63
296,60±
14,04
10,58
99,40±
7,89
17,73
20
4458,00±
168,35**
8,44
229,20±
3,33
3,25
281,80±
12,93
10,26
126,00±
6,95
12,34
303,20±
6,19
4,72
102,60±
4,28
9,33
*р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001
Материал фиксировали в 5% водном растворе нейтрального формалина при t = +4°С,
а затем в 10%, где и хранили на протяжении всего периода исследований. Кусочки
органа промывали в проточной воде в течение 1-2 суток с дальнейшим
изготовлением гистотопограмм (толщина 25-30 мкм) на замораживающем микротоме
МК-25 М [279]. Температуру в морозильной камере криостата поддерживали на
уровне – 15-(-18)єС. Кусочки органа закрепляли на столике объектодержателя.
Выровняв блок, на поверхность примороженной пластины наносили
глицерин-желатиновую смесь (желатин – 3 г, глицерин – 20 мл, вода – до 100 мл).
После изготовления срез с микротомного ножа при помощи препаровальной иглы
помещали на предметное стекло. В последующем срезы подсушивали на предметных
стеклах при комнатной температуре в течение 14-30 суток. Удаление
глицерин-желатиновой смеси перед окраской проводили путем осторожного
погружения срезов в теплую воду (до 40-50єС). Отмытые в воде срезы окрашивали
гематоксилином и эозином по общепринятой методике [280].
Для выявления ретикулярных волокон срезы стенки желудка и ЛУ импрегнировали
азотнокислым серебром по Футу [280, 281].
Таблица 2.2
Материал исследования
Материал
Возраст поросят, сутки
Всего
10
20
Желудок:
-кардиальная часть
15
30
-дно
15
30
-пилорическая часть
15
30
- малая кривизна
15
30
Желудочные ЛУ
15
30
Итого:
75
25
25
25
150
Для окрашивания гистологических срезов конго красным осуществляли заливку
кусочков органа в парафин по общепринятой методике [280]. Срезы (толщиной 5-10
мкм) изготовляли на санном микротоме.
Исследование гистотопограмм проводили при помощи стереоскопического микроскопа
(МБС-10), светового микроскопа «Биолам-ЛОМО» с бинокулярной насадкой АУ-12УЧ2 и
МБИ-6. Количественный микроскопический анализ проводили при помощи
окуляр-микрометра МОВ-1-15х и окулярной вставки с измерительной линейкой по
методу Г.Г. Автандилова [277]. Калибровку окулярных вставок осуществляли при
помощи объект-микрометра. Количественный анализ структурных компонентов ЛУ
проводили методом «точечного подсчета» с использованием окулярных тестовых
вставок. ОП тканевых структур вычисляли по формуле: Vvi = Pi / Pt•100%, где Vvi
– ОП структуры в объеме органа, %; Pi – число точек, попавших на структуру,
шт.; Pt – общее число точек тестовой системы, попавших на гистопрепарат, шт.
Статистическую обработку полученных цифровых данных проводили на персональном
компьютере с использованием стандартных программных пакетов MS Exel и NCSS
2000. Статистически достоверной считали разницу между показателями средних
величин при следующих уровнях: * р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001. Между
тканевыми компонентами стенки различных частей желудка и массой тела поросят
опреде
- Київ+380960830922