РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования проведены в остром и хроническом эксперименте на 104 крысах-самцах линии Вистар 6-ти месячного возраста.
Выбор в качестве объекта исследования крыс линии Вистар обусловлен работами, в которых показана неодинаковая устойчивость сердечно-сосудистых функций различных генетических линий крыс (Вистар, Август и некоторых других) к эмоциональным стрессам [131]. Наиболее устойчивыми по изменению сердечно-сосудистых показателей оказались крысы Вистар и Вег, наиболее чувствительными - крысы Август [131].
2.1. Моделирование экспериментального эмоционального стресса
Для исследования физиологических механизмов формирования эмоционального стресса перспективным направлением является моделирование этого состояния [28]. При этом имеет большое значение выбор адекватной модели, которая удовлетворяла бы некоторым требованиям. Это должна быть конфликтная ситуация, эмоциональный дискомфорт, невозможность удовлетворения ведущей (доминирующей) биологической или социальной потребности [239]. Эмоциональный иммобилизационный стресс рассматривается как ориентированное на будущее когнитивно-аффективное соматическое состояние, при котором возникает чувство беспокойства, фокусированное на будущих угрозах, опасностях и прочих негативных событиях [59, 208]. С этим состоянием ассоциировано негативное аффективное состояние страха, беспомощности и сопровождающие их соматические компоненты [59, 141]. Предлагались различные модели эмоционального стресса для того, чтобы объяснить нейрофизиологические механизмы, лежащие в его основе, и нейроанатомический субстрат [28, 29, 141]. В основу этих моделей положено моделирование первичного воздействия на высшие интегративные системы мозга путем активации нервных аппаратов, наличие информационных нагрузок, и как следствие этого, напряжение эмоциональных систем, памяти и механизмов прогнозирования [27].
В качестве критерия выбора модели эмоционального стресса рассматривался принцип реалистичности для приближения экпериментальных исследований к клинической практике и возможности экстраполяции получаемых данных на человека. Таким образом, была выбрана модель, с помощью которой можно исследовать стрессовый синдром и патогенетические механизмы его формирования.
Одной из наиболее аналитических моделей эмоционального стресса по экзогенному типу, когда напряжение возникает в результате влияния стрессовых факторов из внешней среды, является модель "иммобилизации" [28]. Эта модель отвечает критерию реалистичности. В жизни человека возникает немало ситуаций, связанных с ограничением возможностей реализации биологических и социальных потребностей. При этом в организме происходят существенные сдвиги с ярко выраженной эмоциональной окраской, что вызывает эмоциональное напряжение [30]. Для формирования устойчивого эмоционально-стрессового состояния использовалась классическая модель иммобилизационного стресса. В литературе имеются многочисленные экспериментальные данные по исследованию влияния иммобилизационного стресса на состояние различных систем организма [28, 54, 106, 120, 239], поэтому выбор данной модели позволяет лучше интерпретировать полученные результаты. Животных привязывали за лапы к деревянному основанию 26х15 см в положении на животе, что позволяло регистрировать ЭЭГ. В наших экспериментах животные находились в условиях этой модели в течение 5 дней по 5 часов ежедневно. Исследования проводились на первый и пятый день стрессирования, что дало возможность изучать механизмы острого и хронического эмоционального стресса. Значительное ограничение движения способствует достижению высокого уровня эмоционального напряжения.
2.2. Имплантация электродов, комплекс реанимационно-восстановительных мероприятий
Животные в наших исследованиях использовались через 5-6 дней после стереотаксической операции. Биоэлектрическая активность головного мозга восстанавливается в течение суток [233]. Наши наблюдения за состоянием - поведением и аппетитом подопытных животных показали, что исследования ЭЭГ и ЭКГ можно начинать не ранее пятого дня после операции. Этот срок является наиболее оптимальным. Животные находились в опыте не более 5-6 дней. Как известно, крысы и по достижении половой зрелости продолжают расти, у них увеличивается размер черепа [23]. Поэтому при очень длительных хронических экспериментах возможно смещение кончиков электродов. В течение первых 10-12 дней после операции кончик сохраняет исходную локализацию [233]. Таким образом, использующиеся в наших экспериментах сроки с учетом вышеуказанных ограничений, являются вполне допустимыми. Животным стереотаксическим методом имплантировали нихромовые электроды диаметром 0,1 мм в лаковой изоляции. Операция проводилась под общей анестезией (внутрибрюшинно вводился 5 % раствор тиопентала натрия в дозе 0,2 мл на 100 г веса) с помощью стереотаксического аппарата СЭЖ-2. Череп фиксировался таким образом, что брегма находилась на 1,0 мм выше лямбды [23]. Стереотаксические координаты определялись по атласам Fivkova E., Marsala J. [23] и de Groot J. [178]. Использовались симметричные корковые и лимбико-ретикулярные отведения (AР (переднее-заднее расстояние от брегмы): L (боковое расстояние от брегмы): H (глубина погружения электрода)): 1) корковые области - фронтальные (-2:2:1,5), сенсомоторные (2:3,9:2), париетальные (5:2,5:3) и окципитальные (6,5:3:2,5); 2) лимбико-ретикулярные структуры - миндалевидный комплекс (1:3:7,8), дорсальный гиппокамп, поле СА1 (2:1:3,4), ретикулярная формация среднего мозга (ретикулярное ядро покрышки) (5:1,8:7,3) [23].
По окончании операции внутримышечно вводился антидод тиопентала - бемегрид (1-2 мл 0,5 %-ного раствора). В течение первых трех суток питание осуществлялось парентерально: 4 раза в день вводилось по 2,0 мл 40 % глюкозы с 1 % -ной аскорбиновой кислотой. Введение этого раствора, кроме питания нервных клеток, по-видимому, снимает отек мозга.
Электроды для регистрации ЭКГ имплантирова