РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Групування дослідів
Для вирішення поставлених у роботі завдань були проведені експериментальні дослідження на 140 золотистих сірійських хом'яках масою 130-190 г.
Тварин утримували в умовах акредитованого віварію згідно зі "Стандартними правилами по упорядкуванню, устаткуванню та утриманню експериментальних біологічних клінік (віваріїв)". При роботі з тваринами дотримувались вимог "Європейської конвенції щодо захисту хребетних тварин, які використовуються в експерименті та інших наукових цілях" (Страсбург, 20.09.1985 р.), "Загальних принципів експериментів на тваринах", ухвалених Першим національним конгресом з біоетики (Київ, 2000). Комісією з питань біоетики Вищого державного навчального закладу України "Українська медична стоматологічна академія" (протокол №42 від 8.11.2006 р.) порушень морально-етичних норм при проведенні науково-дослідної роботи не виявлено.
У відповідності до завдань роботи, ми досліджували вплив хронічної інтоксикації нітратом натрію на певні біохімічні та коагулологічні показники периферичної крові, продукцію активних форм кисню та вміст та співвідношення макроергічних сполук у стінці аорти за умов моделювання холестеринового та пероксидного ААС.
Групування дослідів приведені у таблиці 2.1.
Таблиця 2.1
Схема дослідів
Групи тваринКіль-кість
тваринМоделювання патологіїРечовина, що вводиласяДоза
Термін
введення
І . Відтворення холестеринового ААС на тлі хронічної інтоксикації нітратом натрію
Інтактна5 - ---Контрольна І15Хронічна інтоксикація нітратом натрію
Нітрат натрію0,2 г/кг14, 30, 90 дібКонтрольна ІІ10Гіперхолестеринемія
Холестерин, особливо чистий0,2 г/кг60 дібДослідна І
10
З 30-ї доби хронічної інтоксикації нітратом натрію -
холестерин 0,2 г/кг на добу
60 діб
З часу відтворення ААСІзотонічний розчин натрію хлориду1 мл/кг1 раз у тижденьДослідна ІІ10L-NAME5 мг/кг 1 раз у тижденьДослідна ІІІ10Аміногуані-дин10 мг/кг 1 раз у тижденьДослідна ІV10L-аргінін100 мг/кг 1 раз у тиждень
ІІ. Відтворення пероксидного ААС на тлі хронічної інтоксикації нітратом натрію
Інтактна5 - ---Контрольна І15Хронічна інтоксикація нітратом натрію
Нітрат натрію0,2 г/кг14, 30, 90 дібКонтрольна ІІ10Перебування на безантиоксидантному
раціоні
60 діб ---Дослідна І10З 30-ї доби хронічної інтоксикації нітратом натрію -
перебування на безанти-оксидантному
раціоні
60 дібЗ часу відтворення ААСІзотонічний розчин натрію хлориду1 мл/кг1 раз у тижденьДослідна ІІ10L-NAME5 мг/кг 1 раз у тижденьДослідна ІІІ10Аміногуані-дин10 мг/кг 1 раз у тижденьДослідна ІV10L-аргінін100 мг/кг 1 раз у тиждень
Евтаназію хом'яків проводили шляхом декапітації під ефірним наркозом. Об'єктами дослідження були кров та аорта. У тварин забирали кров з правого передсердя у пластиковий шприц. Кров стабілізували за допомогою 3,8% розчину цитрату натрію, а також гепарину. Тканини аорти зважували на електронних терезах та заморожували.
2.2. Методика відтворення холестеринового атероартеріосклерозу
Холестерин особливо чистий у порошку (Ph Eur, BP, NF, JP, фірма Merck) вводили із розрахунку 0,2 г на кг маси тіла на добу інтрагастрально (у вигляді 20% розчину в соняшниковій олії у співвідношенні 1:5) протягом 60 діб [80,299].
Принцип. Надлишок холестерину у їжі призводить до розвитку ГХЕ та масивного відкладення холестерину та його естерів у інтиму, що проявляється у ліпоїдозі артеріальної стінки та є передумовою для бляшкоутворення. Враховуючи низький рівень синтезу у хом'яків аскорбінової кислоти як компоненту захисної АОС, холестеринова модель також може бути використана для відтворення ХС-ААС у цих тварин [127,208,284,299].
2.3. Методика відтворення пероксидного атероартеріосклерозу
Спочатку готували напівнатуральний безантиоксидантний раціон, шляхом перемішування суміші, склад якої вказано у табл. 2.2 [80].
Таблиця 2.2
Склад напівнатурального безантиоксидантного раціону
№ Назва компонентуВміст у раціоні1. Кокосове масло (містить насичені ліпіди) 10%2. Казеїн 10%3. Овес, якій екстрагований 24 години метанолом та 24 години гексаном 15%4. Крохмаль 37,48%5. Сахароза 5%6. Дріжджі сухі 10%7. Ацетат калію 2,1%8. Ацетат магнію 0,42%9. Подрібнена солома 5%10. Вітамін А 20000 ОД на кг корму11. Вітамін D 2000 ОД на кг корму12. Сольова суміш 5%
Склад сольової суміші наведено в табл. 2.3 [80].
Таблиця 2.3
Склад сольової суміші у безантиоксидантному раціоні
№Назва речовиниВміст 1231. Кальцію карбонат двозамінений126,2 г2. Калію фосфат двозамінений 75,8 г1233. Натрію фосфат двозамінений 61,4 г4. Кальцію фосфат тризамінений 117,8 г5. Натрію хлорид 74,1 г6. Магнію сульфат 27,8 г7. Заліза (+2) сульфат 2,1 г8. Марганцю сульфат 3,5 г9. Калію йодид 0,3 г10. Цинку карбонат 0,2 г11. Міді сульфат 0,2 г
Після екстрагування розчинниками овес висушували протягом доби. Суміш ретельно перемішували, додаючи мінімальну кількість води. З суміші робили брикети та випікали в сухожаровій шафі при температурі 150-160?С.
Брикети подрібнювали та згодовували тваринам протягом 60 діб. Крім води та цього корму хом'яки інших кормів не отримували.
Принцип. Перебування на напівнатуральному безантиоксидантному раціоні, у складових компонентах якого відсутні віта