РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Заготівля, консервування, гіпотермічне зберігання, трансплантація плаценти.
Плацента, або дитяче місце, є провізорним органом. синцитіотрофобласт якого синтезує стероїдні гормони (естрогени, андростендіол, тестостерон, прогестерон), а цито-трофобласт - хоріонічний гонадотропін. Плацента також секретує репродуктивні імуномодулятори, адренокортикотропний і соматотропний гормони, оксітоцин і є природничим депо вітамінів, ферментів, різноманітних біологічно активних речовин. Заготівля, консервування, гіпотермічне зберігання, трансплантація плаценти виконувалася згідно методики розробленої в Інституті проблем кріобіології і кріомедицини НАНУ [82, 87].
Заготівля плаценти. Донорами плацент можуть бути здорові породилі, що повинні бути обстежені аналогічно донорам крові. Виключається плацента жінок, вагітність у яких проходила на фоні акушерської чи екстрагенітальної патології (гестози ІІ-ї половини вагітності, імунологічний конфлікт, загроза переривання вагітності, фетоплацентарна недостатність, гіпоксія, гіпотрофія плоду, гострі чи хронічні інфекції, соматичні захворювання, гемотерапія в останні 3 тижні).
Плаценти заготовляються після операції кесарів розтин. Заготівлю плаценти виконують лікар і медсестра. Відповідає за заготівлю плаценти лікар. Весь технологічний ланцюжок, від заготівлі плаценти в пологах до закладання плацентарної тканини в кріобанк, виконують окремо із кожною плацентою. Недопустимо працювати паралельно із кількома плацентами.
Таблиця 2.1
п/пОб'єкт, терміни дослідження(n)Методи дослідження12341. Нативна плацента20Морфологічні методи:
макро-, мікроанатомія; гістологія2. Кріоконсервована плацента5Біохімічні методи:
білки (низько-, середньо-, високомолекулярні);
ліпіди (фосфоліпіди, моногліцериди, холестерин, жирні кислоти, тригліцериди, ефіри холестерину, лізофосфатидилхолін, цереброзиди);
вітаміни (А, Е, В1, В6, В12, Д);
гормони (пролактин, лютеотропний, ХГ, естрадіол, прогестерон, тестостерон, ?-мікроглобулін);
мікроелементи (Cu, Zn, Fe, Mg, K, Na, Ca, Pн)3. Плацента - збереж. 4°С
* 1 с. контроль;
* 2 с. 1-а доба;
* 3 с. 2-і доби45
20
20Гістохімічні методи:
СДГ, ЛДГ, ?-ГФДГ, НАДНДГ, НАДФНДГ4. Плацента - кріопротек.
* 1 с. контроль;
* 2 с. нативна з Me2SO;
* 3 с. кріокон. без Me2SO;
* 4 с. кріокон. з Me2SO40
10
10
10
10Гістохімічні методи:
СДГ, ЛДГ, ?-ГФДГ, НАДНДГ, НАДФНДГКількісний розподіл об'єктів дослідження згідно застосованих методів
Продовження таблиці 2.1
12345Плацента - низькотемпер. збереження
* 1 с. контроль;
* 2 с. 1 д. 4°С;
* 3 с. 1 д. ?20°С;
* 4 с. 1 д. ?20°С і 1 рік при ?196°С;
* 5 с. 1 д. ?196°С і 1 рік при ?20°С50
10
10
10
10
10Біохімічні методи:
білок; продукти ПОЛ (подвійні зв'язки (ПЗ); дієнові кон'югати (ДК); триєнові кон'югати (ТК); тетраєнові кон'югати (ТТК); оксидієнові кон'югати (ОДК); шиффові основи (ШО);
малоновий діальдегід (МДА); глутатіон;
гормони (прогестерон; тестостерон; кортизол).6Морфологія органів після алотрансплантації:
* 1 с. контроль;
* 2 с. розтин 2, 7, 14, 30, 60 д;
* 3 с. транспл. нат. плац. 2, 7, 14, 30, 60 д;
* 4 с. транспл. кріоплац. 2, 7, 14, 30, 60 д.58
15
20
20Гістологічні і гістохімічні методи:
печінка, селезінка, наднирники, яєчники, тимус7Моделювання запалення
* 1 с. контроль;
* 2 с. звич. розвит. запалення (6, 12 г, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 д);
* 3 с. запал. на тлі застос. кріоекстр. плац. (6, 12 г, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 д.)114
54
54Лабораторні та гістологічні методи дослідження периферичної крові, та клітинного складу вогнища запалення, тучних клітинВСЬОГО332
Для заготівлі плаценти необхідні: набір інструментів, матеріалів і розчинів (халат медичний - 2 шт; бахіли - 2 пари; маски - 2 шт; рукавички хірургічні - 2 пари; пелюшки - 3 шт; простирадла - 1 шт; пінцет - 1 шт; шприц 20 мл - 1 шт; ватні кульки - 10 шт; флакони-супутники чи пробірки - 2 шт; ємність (скляна банка в 1 л з герметичною покришкою) - 1 шт). Набір стерилізується при температурі 150°С на протязі 45 хв. Потрібно також 100 мл спирту (96°)для обробки рук. Розчин для заповнення ємності із плацентою.
Склад розчину для заповнення ємності із плацентою. (готується ех tеmроrае): глюгіцир - 50,0 мл або гепарин - 5 тис. од.; розчин NаС1 0,9% - 50,0 мл; розчин глюкози 5% - 50,0 мл; ампіокс - 250 мг; розчини для введення в пупкову вену. Заготівля плаценти виконується в умовах операційної і передопераційної пологового блоку з додержанням правил асептики і антисептики. На столі для прийому новонародженого розташовують дві стерильні пелюшки і ємність з розчином. Хірург, що виконує операцію кесарів розтин, переносить послід на стіл. Лікар, що заготовляє плаценту, кладе послід в ємність, яку разом із верхньою пелюшкою переносить у передопераційну на підготовлений стіл. Лікар набирає шприцом 20 мл плацентарної крові для серологічного контролю в флакони-супутники чи пробірки і віддає медсестрі, що їх маркірує. Після цього в пупкову вену вводять розчини в такій послідовності: глюгіцир - 20 мл або гепарин - 5 тис. од.; ампіокс - 250 тис. од.; розчин глюкози 5% - 20 мл; розчин NaCl 0,9% - 20 мл. Після чого лікар знімає із дистального кінця пуповини затискач, накладає лігатуру, занурює пуповину в ємність, куди додає майже 100 мл фізіологічного розчину, закриває кришкою, завертає в стерильну пелюшку і кладе в транспортувальний контейнер. В такому вигляді плацента готова до транспортування.
Правила транспортування плаценти до кріобанку. Під час транспортування необхідно дотримуватись таких основних вимог: максимально щадячий режим для плаценти, тобто умови із найменшою механічною травматизацією; відносно постійна температура, що може бути забезпечена спеціальною ізотермічною тарою, при температурі зовнішнього середовища від 3 до 10°С допускається транспортування в звичайній упаковці, недопустимі різкі перепади температури; час транспортування не повинен перевищувати двох годин.