РОЗДІЛ 2
ОБ’ЄКТИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
2.1. Експериментальні дослідження
Для досліду було використано 80 кролів (160 очей), на яких проведено 6 серій
експерименту. Кролі породи “шиншила”, вагою 2,0 ± 0,5кг отримували повноцінне,
збалансоване харчування і перебували в належних санітарно-гігієнічних умовах,
відповідно до “Вимог щодо доклінічного вивчення загальнотоксичної дії нових
фармакологічних засобів”.
Обсяг та зміст експериментальних досліджень подані в таблиці 2.1.
Враховуючи той факт, що в офтальмології даларгін був застосований у поодиноких
випадках, а “Вермілат” не застосовувався взагалі, нами було проведено
дослідження впливу цих препаратів на тканини інтактного ока кролика.
1 серія експерименту (9 кролів, 18 очей) (таблиця 2.1) включала дослідження,
які були спрямовані на виявлення реакції тканин ока на дію препаратів даларгіну
(1000 мкг/мл) і “Вермілату” ( 0,1 мкг/мл ) при різних способах їх введення. З
цією метою 3-м кролям (6 очей) інстилювали розчин даларгіну у праве око 4 рази
на день (30 днів), 3-м кролям (6 очей) препарати вводили парабульбарно 1 раз на
день (7 днів) і 3 кролям (6 очей) призначили даларгін у вигляді електрофорезу 1
раз на день (7 днів) у відповідних дозуваннях (1 група). Подібні дослідження
проводилися в другій групі з біологічно активним комплексом “Вермілат”. Для
контрольних спостережень були використані ліві очі в 1-2 групах, які одержували
фізіологічний розчин.
Таблиця 2.1
Групування тварин за серіями експерименту
Серія
досл.
Група тварин
Методи дії
Назва препарату
Доза препарату
Термін досл.
К-сть тва-рин
К-сть очей
Інтактні
1 гр.
Контроль
Інтактні
2 гр
Контроль
Інстиляції,
п/б ін’єкції, електрофорез
Інстиляції
п/б ін’єкції електрофорез
Даларгін
Даларгін
Даларгін
Р-н хлориду Na
“Вермілат”
“Вермілат”
“Вермілат”
Хлорид Na
1000 мкг/мл
- “ -
0,9%
0,1 мкг/мл
- “ -
- “ -
0,9%
30 діб
7 діб
7 діб
30 діб
7 діб
7 діб
3
3 OD
3 OD
3 OD
OS
3 OD
3 OD
3 OD
OS
II
Дослідні
Контроль
Епітеліальний дефект рогівки
Даларгін
Р-н хлориду Na
700 мкг/мл
800 мкг/мл
900 мкг/мл
1000мкг/мл
1500мкг/мл
2000мкг/мл
0,9%
7 діб
7 діб
7 діб
7 діб
7 діб
7 діб
7 діб
3 OD
3 OD
3 OD
3 OD
3 OD
3 OD
OS
III
Дослідні
Контроль
Епітеліальний дефект рогівки
Вермілат
Р-н хлориду Na
0,01 мкг/мл
0,05 мкг/мл
0,1 мкг/мл
0,25 мкг/мл
0,5 мкг/мл
1 мкг/мл
0,9%
7 діб
7 діб
7 діб
7 діб
7 діб
7 діб
7 діб
3 OD
3 OD
3 OD
3 OD
3 OD
3 OD
OS
IV
Дослідні 1 гр.
Дослідні 2 гр.
Контроль
Епітеліально-стромальний
дефект рогівки
Даларгін
п/б ін’єкції
Солкосерил
п/б ін’єкції
Р-н хлориду Na
1000мкг/мл
(0,5 мл 1 р.)
0,1 г/мл
(0,5 мл 1 р.)
0,9%
7 діб
7 діб
7 діб
5 OD
5 OD
OS
Дослідні 1 гр.
Дослідні 2 гр.
Контроль
Епітеліально-стромальний дефект рогівки
до 0,2 мм
“Вермілат”
п/б ін’єкції
Солкосерил
п/б ін’єкції
Р-н хлориду Nа
0,1 мкг/мл
0,1 г/мл
(0,5 мл 1 р.)
0,9%
7 діб
7 діб
7 діб
5 OD
5 OD
OS
VI
Дослідні 1 гр.
Дослідні 2 гр.
Контроль
Епітеліально-стромальний дефект рогівки
до 0,5 мм
Даларгін
електрофорез
“Вермілат”
електрофорез
Р-н хлориду Na
1000мкг/мл
0,1 мкг/мл
0,9%
7 діб
7 діб
7діб
3
3 OD
3 OD
OS
Протягом усього терміну спостережень щодобово проводили біомікроскопію очей з
метою виявлення токсичної або алергічної реакції. ВОТ досліджували тонометром
Маклакова (10 гр.). Також під контролем були середовища ока, судинний тракт,
сітківка. Після закінчення експерименту кроликів виводили з досліду методом
повітряної емболії у стані глибокого наркозу (1,0 мл 1% розчину тіопенталу
натрію на 1 кг маси тварини), проводили енуклеацію з наступним
гістоморфологічним дослідженням.
Під час I - III серії експерименту (18 кролів, 36 очей) проведені дослідження,
які були спрямовані на визначення оптимальної концентрації даларгіну і
«Вермілату» і раціонального режиму їх застосування в умовах поверхневої
експериментальної часткової кератоектомії. Для вивчення впливу поліпептидних
препаратів на процеси епітелізації рогівки була застосована методика часткової
кератоектомії, при якій, у кроликів після епібульбарної анестезії 0,25%
розчином дікаїну в центрі рогової оболонки наносили помітку трепаном діаметром
8 мм з наступним фарбуванням 1% розчином натрієвої солі флюоресцеїну [53]. Це
забезпечувало дозування епітеліального дефекту по площі, як на дослідних, так і
на контрольних очах. Видалення епітелію в межах флюоресцеїнової помітки
проводили спеціально вигнутим шпателем. Ерозія, площею 50 мм2 круглої форми
була розташована в центрі рогівки. Клінічне спостереження за очима тварин
проводилося за такими критеріями: початок та завершення епітелізації, наявність
та відсутність запалення, ступінь васкуляризації рогівки, наслідок
захворювання. На цій моделі проведено пошук оптимальної лікувальної
концентрації даларгіну і “Вермілату” після травматичного пошкодження рогівки.
Досліджено такі концентрації даларгіну: 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000 мкг/мл
та «Вермілату» 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,1, 1,0 мкг/мл (по 3 тварини на кожний
розчин). Препарати вводили 1 раз на добу парабульбарно 0,5 мл даларгіну або
вермілату, залежно від серії досліду, у праве око кроля. В ліве око тварин, яке
вважали за контроль, призначали 0,9%-й фізіологічний розчин. Швидкість
епітелізації рани реєстрували за терміном повного відновлення дефекту рогівки з
урахуванням первинної площі пошкодження, яку вимірювали в мм2 реепітелізованої
поверхні за годину.
Наступні IV та V серії експе
- Київ+380960830922