РАЗДЕЛ 2
Объекты и методы исследования
Решение поставленных задач осуществлялось с помощью экспериментальных,
клинических и лабораторных методов исследования.
Объем проведенных клинико-экспериментальных исследований представлен в табл.
2.1.
Таблица 2.1
Объем клинико-экспериментальных исследований
Объекты исследования
Наименования проведенных
исследований
Количество исследований
Клинические исследования
Практически здоровые люди
Биохимическое исследование ротовой жидкости, электрокинетической подвижности
ядер клеток буккального эпителия, спектроколориметрическое исследование
слизистой оболочки полости рта и твердых тканей зубов
10
Больные с сахарным диабетом
Биохимическое исследование ротовой жидкости до и после коррекции, изучение
электрокинетической подвижности ядер буккального эпителия,
спектроколориметрическое исследование слизистой оболочки полости рта и твердых
тканей зубов
15
Всего:
25
Продолжение табл. 2.1
Экспериментальные исследования
Белые крысы
Изучение динамики развития
структурно-метаболических нарушений в тканях полости рта при стрептозотоциновом
диабете (морфометрические и биохимические исследования, оценка атрофии и
плотности костей альвеолярных отростков челюстей)
64
Изучение безвредности гелей содержащих биологически активные вещества,
определение их влияния на макроскопические показатели внутренних органов,
состав периферической крови,биохимические показатели сыворотки крови
58
Изучение лечебно-профилактической эффектив-ности гелей при аллоксановом
диабете, морфометрические, биохимические методы (изучение показателей
перекисного окисления липидов, активности гидролитических ферментов в
гомогенатах слизистой оболочки полости рта, больших слюнных желез и сыворотки
крови)
60
Всего
182
2.1. Клинические методы обследования
В ходе выполнения клинической части диссертационной работы обследовано 15
больных, страдающих сахарным диабетом типа 1, которые находились на
диспансерном учете и амбулаторном лечении в поликлиническом отделении городской
больницы № 5 города Одессы, и 10 здоровых людей, которые составили контрольную
группу. Клиническому и лабораторному обследованию были подвергнуты лица
мужского и женского пола в возрасте 18-35 лет. Срок заболевания диабетом
составлял от 1 до 5 лет.
Объектом исследования служила слизистая оболочка полости рта, буккальный
эпителий, ротовая жидкость, твердые ткани зубов.
Стоматологическое обследование проводилось у больных, страдающих сахарным
диабетом І типа. Обследование начиналось со сбора анамнеза, оценки общего
состояния организма, детального клинического осмотра слизистой оболочки полости
рта и выявления патологических изменений на видимых кожных покровах. При
визуальном осмотре полости рта пациентов определяли цвет слизистой оболочки, ее
увлажненность, наличие налета и элементов поражений, отечность, складчатость,
консистенцию выделяемой слюны, отмечали качество ухода за полостью рта.
После осмотра полости рта проводили клиническое обследование: сбор
нестимулированной ротовой жидкости, забор буккального эпителия для оценки
подвижности ядер этих клеток. Фотоколориметрические исследования слизистой
оболочки полости рта проводили без жевательной нагрузкой и после стандартной
нагрузки, изучали также спектр поглощения твердых тканей зубов.
Повторное обследование проводили после месячного применения пациентами геля.
Гель рекомендовали наносить на слизистую оболочку полости рта 2 раза в день -
утром, после завтрака и чистки зубов и вечером, перед сном, что позволяло
добиться более пролонгированного нахождения геля на слизистой.
2.2. Лабораторные методы исследования
Нестимулированную ротовую жидкость у обследуемых собирали натощак с 9 до 11
часов утра, путем сплевывания ее в охлаждаемую льдом мерную центрифужную
пробирку в течение 5 минут. Полученную слюну фракционировали 15-минутным
центрифугированием со скоростью 3000 об/мин в рефрижераторной центрифуге РС-6
при температуре + 4 °C. Для биохимических исследований отбирали надосадочную
фракцию.
Кровь животных для получения сыворотки и проведения биохимических исследований
получали путем тотального кровопускания, проводимого под тиопенталовым наркозом
(40 мг/кг внутрибрюшинно). Сыворотку крови получали центрифугированием в
стандартных условиях.
Биохимические исследования проводили в надосадочной жидкости гомогенатов (50
мг/мл 0,1 М трис-HCl буфера рН 7,4), полученной путем центрифугирования в
центрифуге РС-6 при температуре +4 °С со скоростью 3000 об/мин.
2.3. Функциональные методы исследования
Все функциональные методы исследования проведены в отделении детской
стоматологии и ортодонтии Института стоматологии АМН Украины под руководством
д. мед. н. О.В. Деньги и к. тех. н. Э.М. Деньги.
2.3.1. Изучение электрокинетической подвижности ядер клеток буккального
эпителия. Исследование производили по методу В.И. Шахбазова и соавт. [141,
47].
Взятие соскоба эпителия слизистой оболочки проводилось стерильным шпателем
путем легких скоблящих движений по внутренней стороне щеки у всех обследуемых
после сбора ротовой жидкости, поскольку потенциал ядер этих клеток изменяется в
течение суток.
Соскоб буккального эпителия переносили на покровное стекло и с помощью
препаровальной иглы распределяли по поверхности для получения однородного мазка
клеток, наносили на мазок каплю воды и покрывали другим покровным стеклом.
Полученный препарат помещали в камеру для внутриклеточного электрофореза.
Камеру закрепляли на предметном столике микроскопа и подключали выводы
электродов камеры к прибору дл
- Київ+380960830922