Использование белково-полисахаридного антигена для выявления антител к микобактериям туберкулеза

2
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ..........................................................3
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................9
2.1. Возбудители туберкулеза крупного рогатого скота.............10
2.2. Механизм иммунного ответа при туберкулезе крупного рогатого скота.. 12
2.3. Роль ППД туберкулина для млекопитающих в аллергической
диагностике туберкулеза ..................................15
2.4. Серологические и другие методы диагностики туберкулеза крупного
рогатого скота ...................................... 20
2.5. Место ИФА в системе общепринятых методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота........................31
2.6. Технические варианты проведения ИФА... .................. 36
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ...............................40
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ...........................44
4.1. Факторы, влияющие на специфичность и чувствительность непрямого варианта ИФА и их оптимальное сочетание..............44
4.2. Использование белково-полисахаридного антигена для выявления антител к микобактериям туберкулеза ...........................60
4.2.1. Способы получения различных антигенов для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота......................... 60
4.2.2. Использование белково-полисахаридного антигена в непрямом варианте ИФА................................................ 64
4.3. Результаты использования белково-полисахаридного антигена
в ИФА и других серологических тестах..................... 78
4.3.1. Испытание непрямого варианта ИФА.........................78
4.3.2. Испытание комбинированного иммуиопреципитационного теста.82
4.4. Результаты сравнения бактериологического исследования с показателями ИФА...............................................85
5. АНАЛИЗ И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ..............................89
6. ВЫВОДЫ...................................................... 101
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.....................................102
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ............................................103
ПРИЛОЖЕНИЕ.................................................... 131
ВВЕДЕНИЕ
Из инфекционных болезней крупного рогатого скота туберкулез наносит наиболее значительный экономический ущерб за счет снижения продуктивности животных, ухудшения качества продукции, преждевременной выбраковки больного поголовья и высоких заірат на противотуберкулезные мероприятия.
Проблема профилактики и ликвидации туберкулеза актуальна для многих регионов России и, несмотря на осуществляемые ветеринарно-санитарные мероприятия ежегодная заболеваемость крупного рогатого скота туберкулезом составляет около 2% от имеющегося поголовья (В.М. Авилов, В.Ф. Пылинин, 1992).
Одной из особенностей туберкулеза является преобладание латентных форм бактерионосительства. Клинические признаки болезни у крупного рогатого скота проявляются при длительном течении инфекции и при неблагоприятных условиях содержания.
Для прижизненной диагностики 'туберкулеза крупного рогатого скота в нашей стране используется аллергический способ выявления сенсибилизированных микобактериями туберкулеза организма животных при внутрикожном введении туберкулина. Недостатком этого способа является выявление значительного количества животных, неспецифически реагирующих на внутрикож-ное введение туберкулина из-за сенсибилизирования сапрофитными формами микробактерий. При этом для постановки диагноза , особенно в благополучных по туберкулезу хозяйствах, необходимо проведение бактериологических и пат-морфологичсских исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических наблюдений. При послеубойном осмотре реагировавшего на туберкулин крупного рогатого скота не всегда удается установить туберкулезные изменения во внутренних органах и тканях животного (А.И. Кузин, 1980). Бактериологические исследования на туберкулез проводятся в срок до 3-х месяцев, а в некоторых случаях - до 6 месяцев. Кроме того, выявление инфекционного агента
12
Микобактериии различных видов имеют близкую антигенную структуру и обладают общим набором антигенов. Вид M.kansasii считают наиболее близким по антигенному составу к М.bovis (62% общих антигенов). У ряда видов 2 и 3 группы по Раньону (M.marinum, M.intracellularae, M.scrofulaceum) число родственных антигенов доходит до 50%. У остальных атипичных микобактерий количество общих с M.bovis антигенов колеблется в пределах 15-38% (А.П. Лысенко, 1987).
2.2 МЕХАНИЗМ ИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКО ГА
Познание иммунологических механизмов, основанных на этиологических и патогенетических принципах взаимодействия микро- и макроорганизма , является методической основой для совершенствования средств и методов прижизненной диагностики заболевания.
Концепция о нестерильном (инфекционном) характере иммунитета не объясняет всех сторон противотуберкулезной резистентности. Ясно,что при туберкулезе развивается клеточно-опосредованная форма иммунитета, обусловленная макрофагами и Т-лимфоцитами (М.М. Авербах, 1976).
При формировании противотуберкулезного иммунитета центральным клеточным элементом в ответе организма является макрофаги,точнее клетки системы мононуклеарных фагоцитов (моноциты, макрофаги, эпителиоидные клетки), которые обеспечивают индукцию, выраженность проявлений и регуляцию иммунного ответа, т.е. иммуногенез в целом (Н.П. Овдиенко, 1986).
Микобактерии туберкулеза поглощаются нейтрофилами и макрофагами, но только в макрофагах могут подвергаться инактивации, деструкции и, в конечном счете, элиминации.
В ряде случаев микобакгерии туберкулеза могут в макрофагах размножаться , поддерживая хроническое течение болезни , на что обращал внимание еще И.И. Мечников.
13
Вследствие этого для данного заболевания характерна особенность в формировании носительства - тенденция к вялому, скрытотекущему инфекционному процессу.
Как и любая клеточная генерация, система мононуклсарных фагоцитов представлена клетками, отличающимися не только по степени зрелости и уровню метаболической активности, но и по учатию в тех или иных иммунных рак-циях. В целом, благ одаря своей антиген - представляющей и иммуномодулирующей функциям, мононуклеарные фагоциты участвуют во всех формах иммунного ответа: антителообразования, клеточных реакциях гиперчувствитсль-ности замедленного типа, формировании иммунологической памяти и иммунологической толерантности и других. Однако, их различные субпопуляции несут различную иммунологическую нагрузку . Например: протективный иммунитет при туберкулезе связан с Т - лимфоцитами - хелперерами , функции которых могут подавлять Т - лимфоциты - супрессоры и моноциты, преобладающие при анергии (Н.П. Овдиенко и др. ,1987).
Иммунную недостаточность при туберкулезе можно трактовать не только как Г - клеточный дефицит, но и как избыточную активацию тех популяций мононуклеарных фагоцитов , котрые осуществляют характерную для хронических инфекций иммуносупрессию.Клетки этой системы выполняют функции фагоцитоза, прямой кооперации с Т-и В-лимфоцитами, секреции иммуномодуляторов иммуногенеза и ряда биологически активных веществ, выступают и как клетки - эффекторы* и как клетки-мишени для лимфоцитов и их медиаторов (И.С. Фрейдлин,1984).
Установлено, что вследствие внуфимакрофагального паразитирования микобактерии недоступны действию гуморальных факторов иммунитета.
Э.Д.Шляхов (1977) отмечал , что РСК выявляет в, основном IgG, в этой связи недовыявление больных животных возможно вследствие задержки переключения IgM в IgG.