1
Оглавление
Введение...............................................................3
Глава 1. Обзор литературы
1.!. Современное состояние проблемы стандартизации количественного тестирования биологической активности химических веществ.................8
1.1.1. Стандартизация биологических тест-моделей, используемых для изучения биологической активности химических веществ.....................9
1.1.2. Характеристика тест-объектов Saccaharomyces cerevisiae, Candida albicans, Paramecium caudatum...........................................11
1.1.3. Тесты для оценки биологической активности химических веществ.................................................................14
1.1.4. Методы измерения биомассы клеточных тест- моделей..............20
1.2. Методы количественного прогнозирования комбинированного действия веществ. Понятие антагонизма и синергизма действия......................22
1.3. Математические модели роста биологических популяций................25
1.4. Механизм биологической активности химических веществ в организме...............................................................36
1.4.1. Биологическое действие ионов цинка, меди, серебра, никеля и
противогрибковых препаратов на клетку...................................37
Глава 2. Объекты и методы исследования
2.1. Объекты исследования...............................................45
2.2. Методы исследования................................................46
Глава 3. Идентификация кинетических коэффициентов экотоксикологи-ческой модели...........................................................58
3.1. Влияние концентрации глюкозы на кинетику роста дрожжей.............60
3.2.Влияние концентрации инокулята на кинетику роста дрожжей............64
3.3. Определение стандартных параметров роста культуры Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Paramecium caudatum для количественного тестирования индивидуального действия биологически активных веществ
2
3.3.1. Определение параметров роста культуры Saccharomyces cerevisiae..66
3.3.2. Зависимость кинетики роста культуры Saccharomyces cerevisiae от
времени введения стандартных солей ZnS04, CuS04........................71
3.3.3. Определение параметров роста культуры Candida albicans..........74
3.3.4. Определение параметров роста культуры Paramecium caudatum.......76
Глава 4. Определение параметров роста культур Saccharomyces cerevisiae и Candida albicans для количественного тестирования комбинированного действия биологически активных веществ
4.1. Методы оценки комбинированного действия солей ZnS04 и CuS04 на
культуре Saccharomyces cerevisiae......................................79
4.2. Определение параметров роста культуры Saccharomyces cerevisiae в
присутствии комбинаций солей ZnS04 и CuS04.............................89
4.2.1. Исследование изменений распределения по размеру и объёму клеток Saccharomyces cerevisiae в процессе роста при индивидуальном и комбинированном воздействии стандартных солей ZnS04 и CuS04..................................................................94
4.3. Определение стандартных параметров роста культуры дрожжей Candida
albicans в присутствии клотримазола....................................98
4.4. Определение стандартных параметров роста культуры дрожжей Candida
albicans в присутствии смеси клотримазола и AgN03.....................103
4.5 Расчёт цитостатических, цитоцидных и ингибирующих концентраций ZnS04 и CuS04 для культуры Saccharomyces cerevisiae. Расчёт диаграмм «концентрации химических агентов - эффект» для прогнозирования
комбинированного действия ZnS04 и CuS04...............................107
Выводы................................................................111
Список литературы.....................................................113
Приложение............................................................126
ю
паразитологические исследования проводят в соответствии с методиками «Микробиологическое исследование лабораторного животного».
В США, в рамках национального института здоровья, определён перечень вирусных, бактериальных и паразитарных контаминантов, которые должны отсутствовать у животных. В США определены правила доклинических испытаний лекарств, пищевых добавок, в том числе регламентировано качество животных, используемых при этих проверках, правила их содержания и проведения экспериментов [6].
В РФ для успешного проведения контроля лабораторных животных необходимы научно-обоснованные рекомендации и документы с определением методов исследований, сроков их проведения, количества исследуемых животных, а гакже разработка и практическое изготовление стандартных диагностических тестов.
Главное направление использования клеточных культур состоит в тестировании и изучении механизма действия различных веществ. Клетки получают от животного и поддерживают в культуре. При достижении полного монослоя первичную культуру пересевают, рассев повторяют с недельным интервалом в течение нескольких месяцев. Клетки остаются диплоидными и сохраняют особенности исходного эксплантанта. Для предотвращения заражения клетками других линий проводится идентификация клеточных линий с помощью стандартных иммунологических тестов и тестов на чувствительность к вирусам [7].
Тест - микроорганизмы широко используются в медико-биологических исследования, однако способы стандартизации этих объектов не подготовлены. Поэтому очевидна актуальность таких исследований.
Для проверки стерильности и антимикробного действия лекарственных средств используют тест - микроорганизмы: Staphylococcus aureus АТСС 6538 Р, Bacillus subtilis АТСС 6633, Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027, а противогрибкового действия Candida albicans АТСС
11
885-653 [8]. Контроль качества культуры тест-микроорганизмов, хранящейся в запаянных пробирках, производится через 15-30 суток. Для характеристики культурных свойств микроорганизмов производят их высев в пробирки с мясо - пептонным бульоном, затем через 18-20 ч. культуры высевают в чашки Петри с плотной средой для выделения типичных колоний, которые затем используют для приготовления рабочих взвесей. Для выращивания микроорганизмов используют набор питательных сред, компоненты сред должны соответствовать ГОСТ и ТУ.
Целесообразно привести характеристики объектов, использующихся в диссертации.
1.1.2. Характеристика тест - объектов Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Paramecium caudatum
Дрожжи Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans представляют собой
одноклеточные организмы и в то же время обладают чертами характерными для эукариотических клеток. Это в сочетании с хорошо изученной генетической системой делает их идеальным организмом для исследования основ клеточной биологии эукариотных клеток.
Saccharomyces cerevisiae
Клетки Saccharomyces cerevisiae имеют округлую, яйцевидную или эллипсоидную форму; размер от 2.5 до 10 мкм в поперечнике и 4.5 до 21 мкм в длину [9]. Отличительная особенность популяции дрожжевых клеток наличие почек.
Клеточная стенка - жёсткая структура, состоящая из глюкана и маннана, присутствуют хитин и белок. В клетке имеются органоиды: ядро, митохондрии, рибосомы, ЭПР, вакуоль, аппарат Гольджи [10].
При стрессовых физических и химических воздействиях в клетке дрожжей возникают па галогические образования и необратимые изменения, касающиеся мембранных структур. Нарушается деление митохондрий,
- Киев+380960830922