2
Содержание стр.
Введение 3
Глава 1 Контроль качества лекарственных средств - 13
научно-практический раздел фармацевтической микробиологии
1.1 Микрофлора нестерильных лекарственных средств и различные
аспекты ее изучения 23
1.2 Необходимость наличия специализированной лаборатории 58
Глава 2 Материалы и методы 64
2.1 Лекарственные средства 64
2.2 Культуры микроорганизмов 66
2.3. Питательные среды и реактивы 69
. I
2.4. Методы исследования 72
Глава 3 Результаты микробиологического исследования качества ЛС 82
3.1 Сравнительная характеристика степени микробиологической чистоты различных лекарственных средств 82
3.2 Видовой состав микроорганизмов-контаминантов ЛС 113
Глава 4 Методические особенности проведения
микробиологических исследований качества ЛС 119
4.1 Современные подходы к определению антимикробного действия ЛС и его нейтрализации " 122
4.2 Особености пробоподготовки различных лек. форм 145 Глава 5 Разработка методов выделения и идентификации
микроорганизмов-контаминантов ЛС. 147
5.1 Разработка методов количественного определения аэробных
бактерий, дрожжевых и плесневых грибов. 147
5.2 Создание и совершенствование методов выделения и идентификации определенных микроорганизмов 158
5.3 Особенности испытания лекарственных растительных средств
на микробиологическую чистоту' 170
Глава 6 Состояние и перспективы развития материально-технической
базы микробиологических исследований при контроле ЛС 187
Глава 7 Экспериментальное обоснование методики оценки качества
отдельных групп ЛС и вспомогательных веществ 209
Глава 8 Пути совершенстования эффективности работы микро-1 биологической лаборатории в сфере лекарственного обращения 215
8.1 Особенности функционирования лабораторий микробиологии
фармацевтических производств и контрольных служб 215
$ 8.2 Прикладное значение микробиологических показателей при
оценке рисков получения ложных результатов контроля 234
Обсуждение результатов 244
Выводы 257
Список литературы 260
* Приложения 286
Введение
В связи с введением на фармацевтических предприятиях России правил надлежащей производственной практики (GMP) изменяются подходы к контролю качества лекарственных препаратов (ЛИ) и субстанций. Необходимость контроля качества нестерильных лекарственных средств (НЛС) обосновывается важностью обеспечения их безопасности и эффективности, т.е. снижения риска при применении потребителем (Акимочкин В.Е., 2003). «Качество должно быть встроено в лекарственный препарат» (Брахт К. 2004, Pharmaceutical» cGMP 2002). Таким образом, начиная с разработки нового фармацевтического продукта, на всем пути от производства до потребителя, необходимо оценивать риск возникновения некачественного продукта и создавать систему управления рисками; добиваясь обеспечения качества НЛС. Особое место при этом занимают биологические методы испытания фармацевтических препаратов, относящиеся в первую очередь к области фармакологии и микробиологии (Попов А.Ю. 2004, Хабриев Р.У.2005).
Особенностью микробиологических видов анализов является специфика объекта исследования - живого микроорганизма, обладающего индивидуальными особенностями. К наиболее значимым объективным факторам, влияющим на результаты анализа, относятся следующие:
• Наличие антимикробного действия самих лекарственных средств (ЛС) или их компонентов, а также присутствие в некоторых из них консервантов, препятствует выявлению микроорганизмов.
• Опережающий рост сопутствующей микрофлоры, затрудняющий количественное или качественное определение отдельных микроорганизмов-контаминантов.
• Возможно обнаружение микроорганизмов в «стрессовом» состоянии под воздействием условий технологического процесса производства НЛС и неравномерное распределение контаминантов в образцах.
28
Таблица 5
Рекомендуемые пределы микробиологического загрязнения (Уайт 2002)
Класс Образец воздуха КОЕ/м3 Седиментация на чашки (диаметр 90 мм) КОЕ/4ч Контактный чашечный тест КОЕ/чашку Оттиск перчатки ( 5 пальцев) КОЕ/перчатку
А <1 <1 <1 <1
В 10 5 5 5
С 100 50 25 -
э 200 100 50 -
Таблица 6
Преимущества и недостатки метода седиментации (Мюллер 2002)
Преимущества Ограничения*
Простота использования Не требует процесса посева Возможность использования различных питательных сред Экономичность Отбор только быстро оседающих больших частиц Влияние температуры на эффективность сбора Сильное влияние скорости и направления воздушного потока к поверхности среды на результаты теста Неопределенность объема отобранной пробы
Для установления причин контаминации ЛС недостаточно иметь данные по микробной контаминации только исходных компонентов, воды и воздушной среды. Производственные операции технологической схемы изготовления лекарственных препаратов могут при определенных условиях также стать фактором риска в получении некачественной продукции. В экспериментах с
29
тест-культурами бактерий и грибов на примере B.cereus, A.niger, Saccharomyces cereviseae , Rhodotorula glutinis степень микробной загрязненности снижалась при сушке, таблетировании и возрастала при опудривании гранулята (Бочкарева 1979). Установлено, что в основе механизма уменьшения жизнеспособности микроорганизмов при таблетировании лежит прямое механическое повреждение (Graf 1989). Сохранение жизнеспособности клеток бактерий и грибов при постоянном давлении таблетирования зависит от размера микроорганизмов и их физиологического состояния, а также от соотношения размеров микроорганизмов к размеру частиц сжимаемого вещества и механизма сжатия (Plumpton 1982).
Среди источников контаминации наиболее существенным в условиях современных фармацевтических предприятий, даже при работе в условиях GMP, является персонал (Mims 1993). Микроорганизмы могут попадать в продукт или давать ложно положительные результаты при контрольных анализах но показателям «Стерильность» и «Микробиологическая чистота» :
• воздушно-капельным путем с выделениями полости рта
• воздушно-пылевым и контактными путями с незащищенных участков кожи
• воздушно-пылевым и контактными путями с индивидуальной одежды.
Например, из верхних дыхательных путей человека в окружающее пространство выделяется значительное количество микроорганизмов. При чихании на расстоянии 10 м и более распространяется от 100 до 1000 жизнеспособных клеток бактерий и вирусов, со слюной - 102- 106 КОЕ/мл слюны, с секретом из полости носа - 10- 106 КОЕ/мл.
Наиболее обсемененными участками кожи являются кисти рук, лицо, шея. На других участках тела человека количество сапрофитных аэробных бактерий находится в пределах 105 - 106 КОЕ/см2. Структура и физиология кожи такова, что постоянно происходит естественный процесс обновления поверхностного слоя эпидермальных клеток, которые полностью обновляются каждые 4 дня. При этом в процессе слущивания с поверхности кожи отделяется в день 6-14 г чешуек. Количество механических и микробных частиц зависит от характера
- Киев+380960830922