2
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Г ОСТ - Г осударственный стандарт
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДЭПК - диэтилпирокарбонат
ИФА - иммуноферментный анализ
кДНК - комплементарная ДНК
МБТ - микобактерия туберкулеза
МНПЦБТ - Московский научно-производственный центр борьбы с
туберкулезом мРНК - матричная РНК
ОТ - обратная транскрипция
п.о. - пара нуклеотидных оснований
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
СТО - стандарт организации
ТЕ - 10 мМ трис-HCl и 1 мМ ЭДТА
тРНК - транспортная РНК
ФНО - фактор некроза опухоли
ФСП - фармакопейная статья предприятия
ЭДТА - этилендиаминотетраацетат
dATP (дАТФ) - дезоксирибоаденозинтрифосфат
dCTP (дЦТ Ф) - дезоксирибоцитидинтрифосфат
dGTP (дГТФ) - дезоксирибогуанидинтрифосфат
dNTP (дНТ Ф) - дезоксирибонуклеотидтрифосфат
DOTS - Directly Observed Therapy of Short-course - краткосрочная
контролируемая терапия dTTP (дТТ Ф) - дезоксириботимидинтрифосфат
ORF - открытая рамка считывания
RNAzin - ингибитор РНКаз
3
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 5
I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Туберкулез - одна из основных проблем современной медицины ] О
1.2. Клинические признаки туберкулеза 11
1.3. Характеристика возбудителя туберкулеза 15
1.4. Характеристика генома микобактерии туберкулеза 19
1.5. Диагностика туберкулеза 21
1.5.1 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 26
1.5.2 Теоретические основы метода ПЦР 27
1.5.3 Преимущества метода ПЦР как метода диагностики
инфекционных заболеваний 3 О
1.5.4 Ограничения метода ПЦР 32
1.5.5 Выделение ДНК из образцов 32
1.5.6 ПЦР в реальном времени 33
1.5.7 Генодиагностика туберкулеза 37
1.5.8 Стандартизация метода ПЦР 38
1.6. Основные проблемы, связанные с лечением туберкулеза 43
1.7. Резистентность к лекарственным препаратам 46
1.8. Профилактика ту беркулеза 48
1.8.1. Неспецифическая профилактиака 49
1.8.2. Специфическая профилактика 52
1.9. Заключение по литературному обзору 53 И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Определение Д1 ПС микобактерий методом ПЦР 56
2.2. Выделение ДНК и РНК микобактерий из культуральных и клинических образцов 56
2.3. Проведение ОТ-ПЦР и ПЦР в реальном времени для определения суммарного количества нуклеиновых кислот микобактерий туберкулеза 57
15
отеков стоп и болей в грудной клетке возникает на поздних стадиях заболевания. Боли в грудной клетке могут напоминать стенокардию, но чаще они имеют тупой ноющий характер и могут зависеть от положения больного или от фазы дыхания. После лихорадки признаки нарастающей тампонады сердца относятся к наиболее характерным симптомам, обнаруживаемым при физикальном обследовании больных [23].
1.3. Характеристика возбудителя туберкулеза
Возбудитель туберкулеза - Mycobacterium tuberculosis относится к порядку Actinomycetales, семейству Mycobacteriaceae, роду Mycobacterium. Открыт Кохом в 1882 г.
Род Mycobacterium включает более 100 видов, среди которых встречаются облигатные паразиты, сапрофиты и промежуточные формы, вызывающие различные заболевания у человека и животных. Роду Mycobacterium принадлежат микобактерии туберкулезного комплекса (возбудители туберкулеза) и атипичные микобактерии [153].
Микобактерии обладают особым признаком, отличающим их от остальных микробов,- они устойчивы к кислотам, щелочам и спиртам [24].
Микобактерия имеет форму тонкой палочки, иногда прямой, чаще слегка изогнутой, с несколько округленными концами. Длина палочек колеблется от 0,8 до 3-5 мкм, ширина - от 0,2 до 0,5 мкм. Вскоре после открытия микобактерий туберкулеза было обнаружено явление их изменчивости. Кроме типичных палочек встречаются полиморфные формы в виде коротких, соединенных попарно звеньев, гигантских образований с колбовидными разветвлениями, фильтрующиеся и L-формы, способные реверсировать в палочковидные формы. [24,13, 179,157].
Mycobacterium tuberculosis были одним из наиболее ранних объектов, исследовавшихся электронной микроскопией, что отражало высокую значимость его как человеческого патогена [145].
16
Микобактерии М. tuberculosis, как и другие микобактерии, биологически причисляются к группе грамположитсльных микроорганизмов, несмотря на некоторые аномалии при окрашивании по Граму. Они обладают и рядом отличительных особенностей. В частности, почти все известные грамположительные бактерии содержат пептидогликан (перекрестно связанный полимер аминосахаров и аминокислот, определяющий форму бактериальной клетки). У микобактерий молекулы, прикрепляющиеся к этому полимеру или ассоциирующиеся с ним, представлены преимущественно липидами, в то время как у других бактерий это белки и полисахариды [114].
Непатогенные и быстро растущие виды микобактерий поддаются культивированию и обработке легче, чем М. tuberculosis, поэтому многие ультраструктуральные исследования были проведены с ними, а не с самими М. tuberculosis [23].
Оболочка микобактерий состоит из двух разных частей - плазматической мембраны и окружающей её стенки. Эти части обеспечивают осмотическую протекцию, транспорт ионов и молекул, а также механическую поддержку и защиту соответственно [135,136].
Мембраны микобактерий, в том числе и М tuberculosis, имеют классическую структуру из двух слоев с разделяющей их прозрачной прослойкой [159]. Подобный их вид храктерен для «нормальных» биологических мембран [45].
Мембраны микобактерий содержат также и некоторые особые компоненты, например липополисахариды: липоарабиноманнан, липоманнан и фосфатидилинозитол маннозида.
Форма бактерий сохраняется благодаря клеточной стенке. Эта способность клеточной стенки обеспечивается пептидогликаном, химическая структура которого у М tuberculosis очень напоминает аналогичные образования у других бактерий [101]. К этим молекулам с помощью фосфодиэфирных связей прикреплены ветвящиеся цепи полисахарида, арабиногалактана, дистальные
- Киев+380960830922