ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектом исследования послужили надпочечники 225 белых крыс линии Вистар с 1-х
по 30-е сутки жизни. Животных содержали согласно рекомендациям И.П. Западнюк и
др.(1983) [67]. Исследовано 4 группы животных. Первая – интактные животные.
Вторая группа – животные, которым во внутриутробном периоде вводили
гамма-глобулин человека. Третья – животные, которым в пренатальном периоде
вводили вакцину вируса паротита. Четвёртая – контрольные животные, которым
внутриутробно вводили физиологический раствор.
Все новорожденные получены от крыс с датированным сроком беременности.
Беременные самки содержались в условиях по 5 особей в клетке до 14-х суток от
момента зачатия. Животных, отобранных для эксперимента, отсаживали в отдельные
клетки и содержали индивидуально до и после операции. Внутриутробное введение
антигенов и физиологического раствора выполнялось при оперативном вмешательстве
по способу Н.А. Волошина (1981) [164]. На 18-е сутки после зачатия беременным
самкам производили срединную лапаротомию в стерильных условиях под эфирным
наркозом. Поочередно чрезматочно чрезоболочечно подкожно в межлопаточную
область плодам иньекционным путем вводили 0,05 мл соответствующего стерильного
раствора. Брюшина и мышечные слои передней брюшной стенки ушивались непрерывным
кетгутовым швом. На кожные покровы накладывали шелковые швы. Длительность
манипуляций составила 20-25 минут от момента начала погружения крыс в наркоз.
Строго соблюдали правила асептики и антисептики. Крысята рождались доношенными,
в срок, на 21-22 сутки беременности.
В качестве антигена применяли гамма-глобулин человеческий нормальный. Для него
характерны высокая антигенная активность и отсутствие токсического,
пирогенного, адъювантого действий (инструкция к применению иммуноглобулина).
Животным второй группы гамма-глобулин вводили в количестве 0,165 мг белка в
0,05 мл раствора. Для сравнения влияния антигенов белкового и вирусного
происхождения на процесс становления морфофункциональных зон коры надпочечника
использовали вакцину паротита живую сухую в дозе 25 ГАДЕ50, которую вводили
плодам третьей группы в 0,05 мл стерильного физиологического раствора.
Распределение животных по группам, срокам наблюдения и полу представлены в
таблице 2.1.
Забой животных проводили в одно и тоже время суток, с 13.00 до 14.00, с учетом
циркадных ритмов функциональной активности надпочечника и разных клеточных
популяций в морфофункциональных зонах органа, при соблюдении приказа “О мерах
по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием
экспериментальных животных”. Забор надпочечника производили в течение минуты,
минимально касаясь органа. Массу органа определяли с помощью торзионных весов,
вычисляли его относительную массу в процентах к массе тела животного. Для
гистологического, гистохимического и цитохимического исследований надпочечник
фиксировали в 10% нейтральном формалине. Орган обезвоживали в батарее
восходящих спиртов, начиная с 40%. Как промежуточную среду использовали
хлороформ. Органы заливали в смесь парафин-воск-каучук (20:1:1). Из блока
готовили 50-60 серийных срезов толщиной 5-6 мкм. Для обзорного гистологического
и морфометрического исследований использовали окраску гематоксилином и эозином.
Рецепты приготовления растворов взяты из руководств E. Pearse (1962), R.Lillie
(1969).
Методы исследования, использованные в работе, приведены в табл. 2.2.
Гистохимическое выявление и дифференцировку углеводсодержащих соединений
проводили при помощи ШИК-реакции, с постановкой
Таблица 2.1
Распределение животных по группам, видам эксперимента количеству на каждый срок
наблюдения.
Группа
Вид эксперимента
Количествоживотных в
группе
Количество
животных по срокам наблюдения
(сутки после рождения)
1-е
3-и
5-е
7-е
11-е
14-е
21-е
30-е
Интактные крысы
65
15
10
7
2
Внутриутробное
введение гамма-
глобулина
63
10
11
8
6
Внутриутробное
введение вакцины вируса паротита
62
12
10
12
5
Внутриутробное
введение физиоло-
гического раствора
35
6
3
5
Всего
225
42
33
29
32
23
22
22
21
химических и ферментативных контролей по схеме, представленной в работе (Авцин
А.П., Струков А.И., Фукс Б.Б., 1971) [3].
Для ферментативных контролей применяли растворы диастазы и пепсина (Pearse E.,
1962). Блокаду 1,2- гликольных групп проводили при помощи 10% фенилгидразина.
В срезах надпочечников изучали относительную площадь коркового и мозгового