РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Клинические методы обследования больных с бактериальными кератитами
У обследуемых больных изучался анамнез заболевания. В процессе лечения проводился анализ показателей клинических результатов предложенного комплексного лечения больных БК с применением А-бактерина и больных контрольной группы, в которой мы применяли традиционную антибактериальную терапию.
Для этого мы учитывали следующие показатели:
1. Площадь и глубина поражения роговой оболочки.
2. Сроки ее эпителизации.
3. Патологические изменения влаги передней камеры.
4. Сроки рассасывания инфильтрата.
5. Сроки исчезновения перикорнеальной инъекции.
6. Функциональные результаты лечения.
7. Затраченное на лечение количество дней в стационаре.
В процессе выполняемой работы применяли следующие методы исследования:
1. Определение остроты зрения без коррекции, определение остроты зрения с коррекцией с помощью набора оптических стекол.
2. Исследование прозрачных сред глаза в проходящем свете.
3. Офтальмоскопия (прямая и обратная).
4. Световая биомикроскопия с помощью щелевой лампы.
5. Применение флюоресцеина для уточнения результатов эпителизации
роговицы.
6. Измерение инфильтрата и гипопиона с помощью прозрачной миллиметровой линейки, установленной перед объективом щелевой
лампы.
На каждого больного заполнялась карта индивидуального обследования больного, которая отражала изменения течения заболевания в зависимости от применяемого лечения.
2.2. Микробиологические методики
Материал из глаз для микробиологического исследования брали до местного применения антибиотиков (при поступлении больного в стационар).
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам проводились по общепринятым методикам [68, 69].
2.3. Иммунологические методы обследования
Изучение системы Т - лимфоцитов включало определение содержания в периферической крови общих Т - лимфоцитов и их субпопуляций (СД4 и СД8) методом непрямой мембранной иммунофлюоресценции с помощью панели моноклональных антител, произведенных в институте иммунологии (г. Москва) [85]. ИРИ рассчитывался как соотношение Т- хелперов (СД4) и Т- супрессоров (СД8).
Изучение В- системы включало определение содержания в периферической крови В-лимфоцитов (СД 22), сывороточных иммуноглобулинов А, М, G [64, 85, 209, 216]. Находящиеся в сыворотке иммунные комплексы определялись путем преципитации с полиэтиленглюколем [64, 85, 216].
Функциональная активность иммунокомпетентных клеток определялась по уровню стимулированной ФГА пролиферации лимфоцитов.
Учет реакции проводили по включению радиоактивной клетки (3Н- тимедина) в клетки. Индекс стимуляции клеток в РБТЛ рассчитывался как отношение радиоактивности культуры с ФГА (имп/мин) [64, 85, 216].
Фагоцитарная активность нейтрофилов оценивалась на основании таких общепринятых показателей, как количество функционально - активных нейтрофилов в % и абсолютное число фагоцитирующих клеток, а также ФЧ (среднее количество частиц, фагоцитируемое одним нейтрофилом, которые были получены при постановке фагоцитарного теста, завершенный фагоцитоз) с использованием культуры Stathylococcus aureus штамм 209.
Количественное определение комплемента производилось методом иммунного гемолиза, основанном на комплементзависимом лизисе нагруженных антител к эритроцитам барана [85, 216].
В качестве показателей нормы приняты результаты обследования 32 здоровых доноров в возрасте 42,45,7 лет, среди которых было 18 мужчин и 14 женщин.
Оценка состояния клеточного, гуморального иммунитета и фогоцитарной активности нейтрофилов согласно вышеуказанным избранным параметрам иммунологической реактивности проведена у 88 больных основной и у 74 пациентов контрольной группы. Анализ состояния иммунологической реактивности у обследованных больных БК проведен в динамике лечения с учетом степени тяжести поражения роговой оболочки.
2.4. Способ лечения бактериальных кератитов
Препараты на основе живых микробных культур - пробиотики - широко применяются в медицине и ветеринарии для борьбы с вирусными и бактериальными инфекциями [18, 54,87, 90, 119, 132, 147, 191, 192, 274].
Нами был разработан способ комплексного лечения больных с БК различной степени тяжести, включающий применение пробиотика А-бактерина в виде капель. Этот препарат был разработан коллективом сотрудников кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Днепропетровской государственной медицинской академии [55, 91]. Основу А-бактерина составляют аэрококки - представители нормальной микрофлоры организма человека и животных, обладающие широким спектром антагонистического действия на разные виды патогенной и условно - патогенных микроорганизмов. Препарат разрешен для применения в Украине (разрешение МЗ Украины на применение в медицинской практике от 18.01.95г., приказ №10), производится ЗАО "Биолек" (г. Харьков) и рекомендуется для внутреннего и наружного применения; представляет собой лиофилизированную культуру Aerococcus viridans. Производственный штамм Aerococcus viridans -167 выделен из грудного молока. Этот препарат не только проявляет антагонистическое действие на патогенную микрофлору, но и способствует регенерации поврежденной ткани, стимулирует фагоцитоз [45, 91]. Биологическая активность аэрококков обеспечивается за счет функционирования ряда ферментов и продукции биологически активных метаболитов. Применение тест-культур с нарушениями системы репарации повреждений ДНК позволило идентифицировать генотоксические агенты биологического и химического происхождения, продуцируемые аэрококками, и, в частности, водород-пероксид, вызывающий однонитевые разрывы в ДНК микроорганизмов. Продукция водород-пероксида является стабильным признаком производственного штамма аэрококков, из которого готовится А-бактерин. Установлена антиоксидантная роль пировиноградной кислоты, образующейся при оки