ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Содержание и объём экспериментальных исследований
Моделирование катаракты производили посредством воздействия (изолированно и сочетано) 3-аминотриазола, четыреххлористого углерода и света высокой интенсивности на 90 кроликах (180 глаз) - по 15 животных (30 глаз) в каждой группе, половозрелых самцах, массой 2,0-2,2 кг, в возрасте около 4 месяцев, породы "Шиншилла" серого цвета. Животные содержались на стандартном рационе вивария в течение всего эксперимента. Экспериментальных животных забивали методом воздушной эмболии под гексеналовым наркозом. Материал для исследования готовили следующим образом: сразу же после забоя животных глаза энуклеировали, печень выделяли и промывали охлажденным физиологическим раствором. Все последующие операции - приготовление гомогенатов хрусталика и печени проводили при общем и локальном охлаждении (при температуре 0+4°С). Условия гомогенизации: 90 с, скорость вращения 1100 об/мин. Биохимические исследования проводили в надосадочной жидкости после центрифугирования цельного гомогената при 1100 g 5 мин на рефрижераторной центрифуге К-24. Гомогенаты хрусталика и печени разводили в 0,9% растворе хлористого натрия в соотношении 1:9. Перед началом эксперимента, а так же на 2,6, 12 и 30 неделе проводились заборы крови для биохимического исследования, а на заключительном этапе по выведении животных из опыта, также брали на исследование ткань печени и хрусталика для исследований по методу Awashi D.C., Dao D.D., [80]. Полученную из ушной вены кролика кровь готовили для исследования следующим образом: 0,5 мл цельной крови центрифугировали в течение 10 минут при 5000 g. Образовавшийся супернатант без разведения использовали для определения активности фермента в плазме крови.
Животные были разделены на шесть экспериментальных групп:
1 группа - контрольная, животные не подвергались никаким воздействиям;
2 группа - животным с питьевой водой вводили 0,2% раствор 3-аминотриазола из расчета 100 мл на 1 кг массы животных в течение четырех недель [84];
3 группа - животные подвергались воздействию света высокой интенсивности со спектром максимально приближенным к солнечному, составляющими которого были: ультрафиолетовая область 6,3%, область видимого света - 47,5%, инфракрасная область - 46,2%. Плотность мощности светового потока составляла 0,8 - 1,1 Вт/см?. Облучение осуществлялось двумя дуговыми ртутно-вольфрамовыми лампами ДРВ - 750, расположенными в центре квадратной комнаты, площадью - 10 м2 в условиях кондиционированного воздуха, в режиме светового дня, с 9 до 18 часов, в течение 30 недель [28];
4 группа - животные подвергались сочетанному воздействию 0,2% раствора 3-аминотриазола и света высокой интенсивности, как указано в группе 2 и 3 [70];
5 группа - животные подвергались сочетанному воздействию 0,2% раствора 3-аминотриазола с питьевой водой из расчета 10 мл на 1 кг массы животного и 10% раствора четыреххлористого углерода, который вводили внутримышечно в стерильном персиковом масле под фасцию брюшных мышц из расчета 1мл на 1 кг массы животного №5 с интервалом 7 дней [13];
6 группа - животные подвергались сочетанному воздействию 0,2% раствора 3аминотриазола с питьевой водой из расчета 10 мл на 1 кг массы животного, 10% раствора четыреххлористого углерода из расчета 1мл на 1 кг массы животного, внутримышечно №5 с интервалом 7 дней, на фоне облучения светом высокой интенсивности, как указано в группе 3 [70] (табл. 2.1).
Таблица 2.1
Содержание и объём экспериментальных исследований
группыВид катарактогенного
фактораКол-во
живот-ныхКол-во
глаз1.Контрольная группа15302.0,2 % р-р 3-аминотриазола из расчета 100 мл на 1 кг массы животного внутрь вместе с питьевой водой15303.свет высокой интенсивности15304.свет высокой интенсивноти + 0,2% р-р 3-аминотриазола (по схеме см. п. № 2)15305.0,2% р-р 3-аминотриазола + 10% р-р четырёххлористого углерода; 1 мл на 1 кг массы животного, внутримышечно № 5 с интервалом в 7 дней15306.свет высокой интенсивноти + 0,2% р-р 3-аминотриазола + 10% р-р четырёххлористого углерода по схеме1530Всего90180
На всем протяжении эксперимента (в течение 30 недель) изучалось состояние хрусталиков методом биомикроскопии с использованием фотощелевой лампы фирмы "Карл Цейс". В связи с гибелью некоторых животных на протяжении эксперимента, приводимые далее количественные показатели (в %) исчислялись не от исходного количества глаз, а от фактически имевшегося к описываемому сроку. Биомикроскопические изменения в хрусталике экспериментальных животных при моделировании катаракты были разделены нами условно на 6 стадий:
0 стадия - прозрачный хрусталик, задний шов узкий с четкими границами.
1 стадия - единичные мелкие субкапсулярные вакуоли, огрубление и изменение структуры заднего шва, расширение и нечеткость его границ.
2 стадия - многочисленные субкапсулярные вакуоли, помутнения в виде щеточки или мелкоточечных помутнений в области шва.
3 стадия - интенсивные помутнения в ядерной зоне диффузного характера, средней и задней коре.
4 стадия - обширные, сливающиеся между собой, помутнения задних субкапсулярных слоев, ядра и коры, передние субкапсулярные слои полупрозрачны.
5 стадия - полное помутнение хрусталика.
2.2. Объём и клиническая характеристика обследованных больных
На рисунке 2.1 представлена структура и объем клинических исследований пациентов, которые находились под длительным наблюдением. Общий объем динамических исследований составил - 166 пациентов (332 глаза). Как представлено на рис.2.1, первую группу составили лица с прозрачными хрусталиками 56 человек (112 глаз), жителей Одессы, находившихся на отдыхе в профилакториях и состояние здоровья которых было оценено терапевтом-геронтологом. Вторую группу - 110 человек (220 глаз), составили больные, находившиеся на диспансерном учете у гастроэнтеролога в районной поликлинике по поводу хрони