РАЗДЕЛ 2
Материалы и методы исследований
Объект исследований
Исследования проведены на 215 половозрелых крысах-самцах линии Вистар массой
200-220 г, которые содержались в условиях вивария на одинаковом пищевом
рационе. Опыты проводились в одно и тоже время суток с целью исключения влияния
на результаты колебаний суточных ритмов.
Декапитацию животных проводили под легким эфирным наркозом с соблюдением
международных принципов Европейской конвенции (Страсбур, 1985).
Интервальная гипоксическая тренировка (ИГТ)
Тренировки c применением интервальной нормобарической гипоксии проводились
согласно рекомендациям [46, 22]. Принцип тренировки заключался в периодическом
вдыхании воздуха с пониженным содержанием кислорода (12 % О2 в N2),
чередующимся с периодами дыхания атмосферным воздухом.
Животных помещали в герметическую камеру, через которую пропускали
гипоксическую смесь, содержащую 12 % О2 в азоте. В качестве поглотителя СО2
использовали натронную известь. ИГТ проводили в течение 2-х недельного курса,
который состоял из 14 сеансов, каждый по 5 циклов: 15 мин - дыхание
гипоксической смесью чередовалось с 15 мин нормоксическими интервалами. ИГТ
проводилась в утренние часы, каждый день в одно и тоже время.
Моделирование гипоксии нагрузки.
Моделирование гипоксии нагрузки (ГН) осуществляли путем плавания животных в
воде при температуре 30-320С в течение 30 мин каждый день. Высота водяного
столба равнялась 80 см, что не позволяло животному стоять на задних лапах.
Физические тренировки осуществлялись в один день с ИГТ, однако, через 3-4 часа
после проведения последней. Степень ГН определяли по показателям PO2 и pH
крови, а также по уровню потребления кислорода в % от максимального потребления
кислорода (МПК) [109], PO2 и pH крови определяли, используя микробиоанализатор
„Radelkis” (Венгрия). При гипоксии нагрузки компенсированной степени, которая
развивалась при плавании без груза, PO2 в артериальной крови не снижалось, в
венозной снижалось незначительно (до 28-32 мм рт. ст), скорость потребления
кислорода составляла 35-45 % от МПК. При ГН субкомпенсированной степени РО2 в
артериальной крови снижалось до 80-82 мм рт. ст., в венозной крови - до 20-22
мм рт. ст., рН крови значительно сдвигался в кислую сторону - до 6,86, что
соответствовало данным литературы [46, 109]. Груз подбирали индивидуально таким
образом, чтобы скорость потребления кислорода до начала тренировочных нагрузок
составляла 70-75 % максимального потребления кислорода. Груз при этом составлял
7,0 ± 3,0 % от массы тела.
Курсу физических тренировок предшествовал 7-дневный период привыкания животных
к условиям эксперимента, в течение которого постепенно увеличивалась
продолжительность плавания. Общая продолжительность тренировок составляла 28
дней. Деление животных на группы было обусловлено разным сочетанием ИГТ и
физической тренировки. В эти группы в зависимости от схемы эксперимента входили
животные, которые подвергались следующим воздействиям:
Контроль (нетренированные животные).
Физическая тренировка с развитием гипоксии нагрузки компенсированной степени –
плавание без груза 30 мин ежедневно 28 дней.
Физическая тренировка с развитием гипоксии нагрузки субкомпенсированной степени
– плавание с грузом (7,0-3,0 % от массы тела животного) 30 мин ежедневно 28
дней.
Интервальная гипоксическая тренировка (ИГТ) 14 дней.
Физическая тренировка с развитием гипоксии нагрузки субкомпенсированной степени
– плавание с грузом 30 мин ежедневно 28 дней + в первые 14 дней добавление
ИГТ.
Физическая тренировка с развитием субкомпенсированной степени гипоксии нагрузки
– плавание с грузом 30 мин ежедневно 28 дней + в последние 14 дней добавление
ИГТ.
Использовались следующие функциональные тесты:
-тест на стандартную физическую нагрузку (СН) - плавание с двойным грузом (14,0
± 6,0 % от массы тела) в течение 10 мин;
-тест на физическую выносливость (ФВ) - плавание с двойным грузом (14,0 ± 6,0 %
от массы тела) до отказа от работы.
Схема экспериментальных исследований приведена на рис. 2.1.
Рис. 2.1 Схема экспериментальных исследований.
Дополнительные детали распределения крыс на группы и порядок эксперимента будут
приведены в разделах собственных исследований. Так, в
электронномикроскопических исследованиях была использована дополнительная
группа, состоящая их 5 животных, которые подвергались однократному воздействию
гипоксии нагрузки субкомпенсированной степени.
Определение скорости потребления кислорода в покое (VO2) и максимального
потребления кислорода (МПК, или VO2max).
Определение VO2 у крыс проводили общепринятым манометрическим методом [37].
Для определения МПК нами была разработана конструкция герметической камеры с
вмонтированным манометрическим датчиком и креплением для контейнеров с
поглотителем СО2 натронной известью (рис. 2.1). После каждого измерения
поглотитель заменялся. Камера помещалась в резервуар с водой, в котором
животное могло выполнять физическую нагрузку в закрытом пространстве с заданным
объемом воздуха.
Во время выполнения физической нагрузки манометрический датчик регистрировал
падение давления в камере в единицу времени.
МПК определяли при ступенчатом повышении нагрузки согласно принципам,
изложенным в работе [131]. МПК определялось как скорость потребления кислорода,
после достижения которой повышение нагрузки не было связано с дальнейшим
возрастанием (± 5 %) VO2 [108].
Определение физической выносливости (ФВ)
Тестирование животных на физическую выносливость (ФВ) осуществляли путем
регистрации времени, на протяжении которого животные выполняли физическую
нагрузку с удвоенным грузом, определенным по МПК для тренировок, до от
- Київ+380960830922