ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Технология получения биологического препарата на основе спинномозговой
жидкости крупного рогатого скота
Прижизненное взятие исходного сырья (СМЖ) производили на донорских пунктах в
ОАО «Широкое» Симферопольского района и в научно-производственном объединении
«Элита» Красногвардейского района Автономной республики Крым, где
ветеринарно-санитарный надзор и зоотехнические условия содержания животных
находятся на высоком уровне. Спинномозговую жидкость получали от коров молочной
высокопродуктивной красной степной породы. В качестве животных-доноров
использовали только лактирующих коров в возрасте 4-6 лет, через 2-3 недели
после первого отела (период физиологической ановуляции), ликвор которых
содержит максимальный спектр БАВ [35].
Забор ликвора производили без анестезии. Фиксацию животного-донора осуществляли
при помощи станка для прижизненного получения СМЖ КРС, сконструированного в
научно-производственном объединении «Элита». Взятие ликвора производили путем
субокципитальной пункции, т.к. наибольшая концентрация веществ, обладающих
физиологической активностью, определяется в цистернальном ликворе, по сравнению
с люмбальным. Известно, что содержание БАВ в ликворе субарахноидального
пространства спинного мозга ниже вследствие их обменной инактивации [35]. Для
определения глубины прокола пользовались рекомендациями для определения
расстояния от кожи до большой цистерны мозга по длине окружности шеи животного
[226]. Взятие ликвора осуществлял ветврач, обученный этой технике. Для
субокципитальной пункции применяли стандартные иглы Бира. После попадания иглы
в большую цистерну мозга и извлечения мандрена, при появлении СМЖ, к канюле
иглы присоединяли вакуумный шланг полузакрытой системы для прижизненного
извлечения ликвора у КРС. Ликвор поступал в стерильные флаконы или в
пластикатные системы ПК-11-01, предназначенные для консервирования крови. СМЖ
выбраковывали, если при взятии, визуально, жидкость была мутная или с примесью
крови. Весь процесс получения СМЖ проходил в стерильных условиях.
Далее емкости со СМЖ в жидком азоте доставляли на Крымскую республиканскую
станцию переливания крови, где ликвор помещали в холодильники типа НС 12/50 при
температуре от –40 до –70оC и хранили 7 дней и более. Целью данного способа
консервации является стремление сохранить возможно большее количество БАВ. При
низких температурах течение физиологических процессов в клетках и жидкостях
ингибируется [227, 228]. Затем брали часть ликвора из холодильников и оттаивали
его при комнатной температуре в течение 24 часов. Размороженный ликвор
подвергали экологической экспертизе на Крымской республиканской станции
переливания крови, на Крымской республиканской санитарно-эпидемиологисеской
станции и в Крымской ветеринарной лаборатории. Осуществляли следующее:
Определение мощности экспозиционной дозы внешнего гамма-излучения, определение
поверхностной радиоактивной загрязненности, суммарной удельной активности
бета-излучающих нуклидов, изучение радионуклидного состава, содержания
цезия-137.
Определение содержания солей тяжелых металлов, ядохимикатов, гербицидов,
пестицидов, фунгицидов, нитратов, нитритов.
Определение содержания антибиотиков: пенициллина, стрептомицина, тетрациклина,
гризина.
После получения отрицательного результата экологической экспертизы СМЖ в
замороженном состоянии направляли на завод медицинских изделий в город
Белгород-Днестровский Одесской области для гамма-стерилизации.
Гамма-стерилизацию проводили в транспортной таре в контейнерах на промышленной
гамма-установке «Стерилизатор-3» в течение 5 часов при экспозиции 1,5 Мрад. При
таком режиме стерилизации происходит обезвреживание бактерий, вирусов,
опухолевых клеток, грибковых и актиномикозных мицелл, лейкозных бластов при
сохраненнии биологической полноценности ликвора [229]. После получения от
завода заключения о стерильности СМЖ, ее в контейнерах доставляли на станцию
переливания крови, где хранили в замороженном виде.
Такой способ получения и обработки СМЖ КРС впервые был предложен В.В. Ткачом
[52]. Особенности СМЖ, использованной в наших исследованиях, заключаются в том,
что мы получали СМЖ лактирующих коров только в период физиологической
ановуляции донора (2-3 недели после первого отела). Таким образом, нами был
получен биологический препарат, представляющий собой цельную, прижизненно
взятую, криоконсервированную, гамма-стерилизованную СМЖ лактирующих коров. Этот
препарат использовали для проведения экспериментальных исследований.
2.2. Материал исследования, схема постановки эксперимента и режим введения
подопытным животным спинномозговой жидкости
В качестве подопытных животных использовали самок белых крыс линии “Вистар”,
полученных в виварии Крымского государственного медицинского университета им.
С.И. Георгиевского в количестве 160 особей и самок свиней крупной белой породы
(120 голов). Всех животных на протяжении эксперимента содержали согласно
правилам, утвержденным Европейской конвенцией по защите позвоночных животных
(Страсбург, 1986 г). Опыты на свиньях проводили в условиях производственного
эксперимента на следующих животноводческих базах: ОАО ”Широкое”
Симферопольского района, подсобном хозяйстве крымского племенного предприятия
села Пасечное Белогорского района, научно-производственном объединении ”Элита”
Красногвардейского района Автономной республики Крым. Комиссией по биоэтике
Крымского государственного медицинского университета им. С.И. Георгиевского
(протокол № 9 от 14.03.2006 г.) установлено, что проведенное научное
ис
- Київ+380960830922