РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика проведенных исследований
Для выполнения поставленных задач обследовано в динамике 103 больных
токсокарозом (Т) в возрасте от 15 до 75 лет (44 мужчины и 59 женщин),
находящихся на стационарном лечении в паразитологическом отделении Областной
клинической инфекционной больницы города Харькова, а также 24 больных (14
мужчин и 10 женщин) после комплексной противопаразитарной патогенетической
терапии в 2000-2006 гг. Для сравнения и контроля аналогично обследованы 20
практически здоровых людей соответствующего возраста. Диагноз токсокароз у всех
больных и его отсутствие в контрольной группе подтверждены в соответствии с
критериями диагностики [4, 5, 96] на основании совокупности эпидемиологического
и клинического анамнеза, клинико-лабораторных показателей и результатов
иммуноферментного анализа на токсокароз.
Помимо углубленного унифицированного клинико-лабораторного и инструментального
обследования проводилось исследование иммунологической реактивности путем
изучения комплекса показателей, характеризующих клеточный и гуморальный
иммунитет, а также компенсаторно-приспособительных возможностей организма
больных токсокарозом с помощью определения содержания в крови основных
адаптивных гормонов – инсулина и кортизола, вычисления их соотношения
(коэффициента напряжения). Исследования проводились на базе лаборатории
радиационной иммунологии института медицинской радиологии им. С.П. Григорьева
АМН Украины.
Оценка эпидемической ситуации по токсокарозу проводилась путем выборочного
сероэпидемиологического обследования 450 жителей Харьковской области (из них
140 детей) методом иммуноферментного анализа (ИФА) на базе паразитологического
отдела Областной санитарно-эпидемиологической станции Харьковской области и
вирусологической лаборатории Областной детской инфекционной клинической
больницы г. Харькова в 2001-2005 гг.
Оценка загрязнения объектов внешней среды возбудителем токсокароза проводилась
на базе паразитологического отдела Областной санитарно-эпидемиологической
станции Харьковской области и санитарно–эпидемиологической станции Харьковского
района путем санитарно–гельминтологического исследования проб почвы, воды,
овощей, взятых в Харькове и во всех 26 районах области в период 2000-2004 гг.
Всего исследовано 8937 проб почвы (6216 проб в сельской и 2721 проба в
городской местности), 4519 проб воды и 4923 пробы овощей и зелени.
В связи с тем, что одним из показателей состояния санитарно–гельминтологической
обстановки на конкретной территории является уровень пораженности собак
токсокарозом, проведен ретроспективный эпидемиологический анализ официальной
статистики Государственной ветеринарной службы о численности собак в области и
результатов обследования 576 собак на токсокароз.
2.2. Методы исследований
В работе применены иммунологические, радиоиммунологические, серологические,
санитарно-гельминтологические, клинико-лабораторные, биохимические,
инструментальные методы исследования и методы статистической обработки
полученных результатов.
Оценка загрязненности объектов внешней среды (почвы, овощей и зелени)
проводилась по методу академика Н.А. Романенко [109, 110, 155, 156].
Отбор проб почвы проводился в весенне-летний периоды во дворах на поверхности и
глубине 1-3 см и смета на асфальте, где играют дети.
С поверхности пробы собирали ложкой, совочком или большим шпателем. При
выяснении общей загрязненности яйцами гельминтов почвы на территории выделяли
площадку размером 25м2. В 5-10 местах по диагонали площадки с поверхности и
соответствующих глубин отбирали навески почвы по 10-20 г каждая. Путем
тщательного перемешивания соответствующих навесок почвы составляли средние
пробы (100-200 г).
Пробы отбирали на территории детских учреждений: на игровых площадках, около
входа и вокруг помещения, вдоль забора, в песочницах, у веранд, в домиках, у
летнего пищеблока, стадиона. Особое внимание обращали на места выгула собак и
кошек, на пляжах: в постоянно увлажняемых местах на берегу, в прилегающей к
пляжу полосе суши, в закрытых павильонах, вокруг и внутри кабин для раздевания
и одевания, у уборных; в парках, на бульварах и стадионах: в песочницах, на
игровых площадках, с клумб у павильонов, возле уборных.
Доставленные в лабораторию пробы почвы хранили в пакетах при температуре + 5?С,
не более месяца.
Пробы овощей, зелени отбирали из овощехранилищ, детских учреждений, больших
санаториев, на рынках, в столовых, в микроочагах геогельминтозов
(индивидуальные усадьбы на огородах, садах, ягодниках) весом до 0,5-1,0 кг
овощей, ягод и до 0,4-0,5 кг зелени.
Для выявления антител в сыворотке крови обследованных больных к антигенам
токсокар использовался метод иммуноферментного анализа (ИФА), разработанный ЗАО
“Вектор-Бест” (г. Новосибирск), федеральная лицензия № 42/055/2001 [181,184].
Образцы крови у обследуемых лиц в количестве не менее 0,5 мл отбирали из вены
или пальца натощак. Сыворотку крови хранили при температуре 2-10?С, если ее
исследовали более чем через 48 часов.
Исследуемую сыворотку оценивали как положительную реагирующую, если
соответствующее ее разведению 1:200 значение оптической плотности (ОП) было
больше или равно значению, определяемому формулой:
ОПКд = 3*ОП К-,
где ОПКд – оптическая плотность контроля диагностики
ОП К- – оптическая плотность отрицательного контрольного образца
За титр антител к антигенам токсокар принимают то наибольшее разведение
исследуемой сыворотки, при котором ее оптическая плотность равна или превышает
расчетное значение ОПкд .
Иммунологическое
- Київ+380960830922