Глава 2. Материалы и методы.
Материал исследования.
Материалом исследования служили половозрелые самки крыс популяции Вистар массой 180-200 г. Работа с животными осуществлялась с соблюдением положения Европейской конвенции по охране позвоночных животных и национального законодательства по гуманному обращению с животными. В эксперименте задействовано 180 самок крыс, которые были распределены на группы: 1- контрольная; 2- после эмоционально-болевого стресса; 3- после воздействия ритмической кранио-церебральной гипотермии; 4- после последовательных воздействий эмоционально-болевого стресса и ритмической кранио-церебральной гипотермии.
Животные содержались в условиях вивария при световом режиме 10 ч свет и 14 ч темнота и на стандартном пищевом рационе. Так как репродуктивная система подвержена сезонным колебаниям [15], эксперименты проводились в одно и то же время года - с ноября по февраль. Различные манипуляции (взятие вагинальных мазков, инъецирование, ритмические холодовые воздействия, декапитация) осуществлялись в первой половине дня. Из эксперимента животных выводили путем декапитации под эфирным наркозом.
Метод ритмической кранио-церебральной гипотермии.
Гипотермические воздействия проводили на оригинальной установке, состоящей из электрогенератора и электроэнцефалографа, подключенных к планшетному потенциометру, у которого каретка с пером была заменена шторкой для прерывания потока холодного воздуха (-4 - -6 0С), подаваемого от промышленного гипотерма в камеры с животными при частоте воздействия 0,1-0,2 Гц (ритмическая гипотермия). Время воздействия не превышало 90 минут, ректальная температура не опускалась ниже 36 0С. В ходе экспериментов измеряли температуру в прямой кишке при помощи электронного термометра СТЗ-18 или ртутного термометра.
Модель эмоционально-болевого стресса.
Модель эмоционально-болевого стресса, усиленного периодической иммобилизацией, достигали нанесением животным болевых раздражений электрическим током (15 с воздействие, 45 с - перерыв) в течение 30 минут на протяжение 20 дней [31,140]. Для этих целей использовали освещенную камеру, к полу которой был подведен электрический ток, замыкание контактов для его подачи производили в случайном режиме. Порог чувствительности определяли для каждого животного индивидуально, при этом напряжение не превышало 80 В. Периодически крыс помещали в пластиковые контейнеры, существенно ограничивающие движение, для регистрации ЭЭГ, ЭКГ и потенциации стрессовых реакций. Уровень секреции 3Н-НА и 3Н-СТ в эпифизе определяли радиоизотопным методом.
Методы оценки состояния репродуктивних функций.
О состоянии репродуктивной функции животных судили по эстральному циклу (на основании цитологии влагалищных мазков анализировалась общая продолжительность цикла и его фазовая структура). Для оценки фертильности самок крыс осуществлялось их спаривание с интактными самцами, которые предварительно тестировались на половую активность. В вагинальных мазках самок регистрировались сперматозоиды. Индексы плодовитости и беременности вычислялись по следующим формулам:
Индекс плодовитости = Число оплодотворенных самок х 100%
число самок в опыте
Индекс беременности= Число беременных самок х 100%
число оплодотворенных самок
Методики стереотаксической операции, регистрации и анализа электроэнцефалограмм.
Для проведення стереотаксических операций на крысах использован специальный прибор - СЕЖ-3. Электроды и канюли вводили в определенные структуры мога без прямого визуального контроля, по координатам. Использовали индивидуальные направления, связанные с соответственным расположением внешних ориентиров на черепе структурам мозга . По окончанию экспериментов проводился морфологический контроль локализации push-pull канюли и регистрирующих електродов [110] .
Биоэлектрическую активность в диапазоне 0,1-35 Гц отводили монополярно игольчатыми электродами с сенсомоторной обрасти коры (расстояние между отведениями 2 мм) и регистрировали на энцефалографе "Bioscript-1"и после аналого-цифрового преобразования сигналов заносили в базу данных компьютера.
Кривые биоэлектрической ритмики представляют собой реализации случайных процессов. Если на интервале (Q, T) производится n подсчетов, то для полного описания процесса х (t) процесса в статистическом смысле необходимо задать его n-мерную функцию распределения или n-мерную совместную плотность вероятности,
W n (x1t1; x2t2 ; ...; xn tn ) = P [x1 < x(t1) ?x1 + dx1; ...;
xn < x(t n) ? xn +dxn]
определяющую вероятность попадания значений x(t) в интервалы
(x1, x1+ dx1), ..., (xn, xn + dxn) в соответствующие моменты времени t1, t2, ..., tn. Однако, вычисление таких многомерных функций распределения представляет собой сложную задачу и поэтому редко применяется на практике. В большинстве случаев случайные процессы достаточно хорошо описываются "моментами" распределения, в частности, корреляционными моментами
?
Kij=Rxx(ti, tj)= ?[xi- mX(ti)] [xj- mX (tj)] W2 (xi,ti ; xj, tj )dxi dxj
-?
Для стационарных процессов корреляционные моменты зависят только от временного сдвига
Kij = Rxx(ti,tj) = Rxx(?ti -tj?) = Rxx (?); ? =?ti - tj?
Если стационарный процесс является гауссовым, для его изучения можно ограничиться корреляционными методами, поскольку корреляционные характеристики полностью определяют статистические свойства такого процесса.
Наряду с корреляционными моментами, усредненными по ансамблю реализации можно определить аналогичную характеристику, усредненную во времени. Такой характеристикой явл