РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Постановка задач исследования
Проводимые исследования были направлены на поиски и обоснование дозовой
зависимости антиоксидантов при стабилизации каротина микробиологического из
биомассы мукорового микрогриба Blakeslea trispora для увеличения срока
сохранности поливитаминного комплекса до 2-х и более лет и разработку на его
основе технологий новых высокоэффективных каротинсодержащих средств в разной
лекарственной форме.
Это в свою очередь, потребовало изучить ряд вопросов и решить ряд задач как
научного, прикладного, технологического характера, так и
конструктивно-аппаратурного оформления разрабатываемых технологических
процессов.
Для решения проблемы стабилизации каротина микробиологического от
деструктивного разрушения с целью увеличения срока хранения, сохранения
физико-химического строения и биологической активности проводилось в динамике
изучение:
- кинетики окисления каротинового концентрата, получаемого биотехнологическим
методом при действии на среду культивирования мукорового гриба Blakeslea
trispora различных факторов (витаминов, микроэлементов; изменения соотношения
С/N; антиоксидантов и прооксидантов;
-стабилизирующей роли разных антиоксидантов в отношении каротина
микробиологического на разных жировых носителях (растительные масла, твердые
жиры, эмульсии);
-групп антиоксидантов, проявляющих синергетическое защитное действие в
отношении увеличения периода индукции при окислении каротина;
-стехиометрических коэффициентов групп антиоксидантов в защите каротина от
окислительной деструкции в твердых жировых основах;
-стабилизирующей роли новых антиоксидантов в защите каротина
микробиологического в лекарственной форме от окисления;
-сохранности физико-химических свойств в процессе длительного хранения и
биологической активности стабилизированного каротина микробиологического при
разных патологических состояниях на моделях заболеваний.
Для решения задач технологического характера изучалось:
-влияние отдельных технологических факторов и их взаимное влияние на скорость
окисления каротина микробиологического и основных жирорастворимых компонентов
разработанных рецептур;
-кинетика и особенности окисления каротина микробиологического в присутствии
антиоксидантов разного класса при разных температурах;
-физико-химические показатели окисляющихся компонентов лекарственных форм в
процессе длительного хранения;
-определение рационального технологического режима получения каротинсодержащей
бисквитной продукции, обогащенной биологически-активными добавками;
-влияние технологических факторов на стабильность каротина микробиологического
в лекарственных формах на жирах, растительных маслах, в эмульсиях и в мягких
желатиновых капсулах.
-изучались пути защиты от окисления как сырья, так и конечного продукта в
процессе производства;
-разрабатывались технологические параметры в процессе производства новых
каротинсодержащих средств: в виде суппозиториев, капсул, пенного аэрозольного
препарата.
Для утверждения разработанных каротинсодержащих лекарственных препаратов в
Фармакологическом комитете требовалось:
-провести доклинические исследования новых средств на разных моделях
заболеваний с целью доказательства сохранения лечебного действия и
специфической активности стабилизированного каротина;
-изучить безвредность вновь разработанных препаратов в соответствии с
требованиями Фармакологического комитета.
Для реализации поставленных задач нами использованы следующие методы
исследований: кинетические [120-123], химические [124-126] физико-химические
[127-128], биохимические, физиологические и микробиологические.
Для промышленного выпуска препарата было необходимо:
-разработать проекты временных фармакопейных статей (ВФС) и утвердить их на
специализированной комиссии Фармкомитета;
-разработать: опытно-промышленные или пусковые регламенты.
Экспериментальные работы выполнены в период с 1984 г. по 2001 г.
Промышленные испытания проводились на: ПО “Башбиофарм” (г.Уфа, Россия), ПО
“Алтайвитамины (г.Бийск, Россия), химфармзаводе (Нижний-Новгород, Россия), ХФЗ
“Красная звезда” (г.Харьков, Украина), ХФЗ “Витаминный з-д”, г.Умань,
Украина).
Экспериментальные работы проводились на подсолнечном, кукурузном, соевом и
амарантовом маслах, а опытно-промышленные и промышленные – на подсолнечном
рафинированном дезодорированном масле. В проведении отдельных исследовательских
работ принимали участие сотрудники ХГПУ – Черненькая Л.А., Мирошник Е.Н.,
Кричковская Я.В., а также инженерно-технические работники вышеперечисленных
заводов.
2.2. Объекты исследования
В работе использована культура микроскопического мукорового гриба Blakeslea
trispora, относящаяся к семейству Mucoraceae, порядку Mucorales (класс
Zygomycetes) Blakeslea trispora, полученная на крахмально-паточном заводе
(г.Свердловск). Используемая в качестве продуцента каротиноидов культура
микроскопического мукорового гриба относится к непатогенным микроорганизмам,
его биомасса нетоксична для теплокровных животных. Этот микроорганизм быстро
развивается на синтетических питательных средах, содержащих органические
источники азота и различные углеводы (мальтозу, глюкозу и др.), рН среды
6,3-6,8.
Каротин микробиологический, получаемый из биомассы мукорового гриба Blakeslea
trispora (ТУ 64-6-149-80).
Масла: растительное подсолнечное (ТУ 1199-73, ТУ 1199-93, гидратированное
подсолнечное (МРТУ-18/135-66), соевое, кукурузное, амарантовое, масло
облепиховое (ФС 42-1730-81). Жиры: кондитерский (ГОСТ 28414-89), “Фритюрный”
- Київ+380960830922