СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Генетические изменения при канцерогенезе
1.1.1. Рак и гены, ответственные за развитие опухолей. Онкогены и гены-супрессоры роста злокачественных опухолей .
1.1.2. Анализ широкомасштабных исследований генома в злокачественных опухолях .
1.1.3. Изменения в генах -ей хромосомы человека в опухолях .
1.2. Анализ хромосомных аберраций в злокачественных опухолях
1.2.1. Потеря гетерозиготности (LOH)
1.2.2. LOH и потенциальные гены-супрессоры на коротком плече хромосомы человека .
1.3. Эпигенетические модификации при раке: роль в регуляции экспресси генов
1.3.1. CpG-островки и гены
1.3.2. CpG-островки и метилирование
1.3. Неполное метилирование и повышенный уровень метилирования
1.3.4. Эпигенетический механизм инактивации генов .
1.4. Новые молекулярно-биологические подходы в исследовании рака .
1.4.1. Количественная ПЦР
1.4.2. Микропанели .
1.4.3. Функциональные тесты идентификации генов-супрессоров
опухолей .
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Биологический материал .
2.2. Стандартные молекулярные процедуры .
2.3. Библиотеки NotI-связующих клонов .
2.4. PFGE и гибридизация
2. Молекулярные пробы
2.6. Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) .
2.7. Молекулярное клонирование генов и анализ их экспрессии
2.8. Биоинформатика
2.9. ПЦР
2 Полиморфные маркеры, маркеры STS и микросаттелитный анализ .
2 Временная трансфекция и иммунное окрашивание .
2 Мутационный анализ
2 Анализ роста клеток в полужидком агаре .
2 Изготовление и анализ микропанелей
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ .
3.1. Картирование индивидуальных NotI-клонов -й хромосомы
человека
3.2. Участок LUCA в области р. и определение потенциальных TSG на этом участке
3.2.1. Физическая карта участка LUCA .
3.2.2. Генетическая карта участка LUCA .
3.3. Участок AP в области р. и определение потенциальных TSG на этом участке
3.3.1. Физическая карта участка AP
3.3.2. Генетическая карта участка AP . .
3.3.3. Статус метилирования участка AP в линиях клеток и биопсиях карциномы почки
3.4. Количественный ПЦР и LOH участка p. .
3.4.1. Анализ биопсий из различных видов рака .
3.4.1.1. Анализ участка р.3. при раке шейки матки .
3.4.1.2. Анализ участка р.3. при раке почки, мелкоклеточного рака лёгкого и рака молочной железы
3.4.2. Сравнение данных LOH и количественной ПЦР
3.4.3. Изучение гомозиготных делеций
3.5. Идентификация генов-супрессоров роста опухолей с помощью теста на инактивацию гена (GIT) .
3.5.1. Общая стратегия эксперимента
3.5.2. Экспресиия RB и ?RB в трансфецированных клонах in vitro .
3.5.3. Рост опухолей в мышах SCID
3.5.4. Конструирование эписомального вектора для GIT .
3.5.4.1. Создание клеточных линий с постоянной экспрессией tTA .
3.5.4.2. Регуляция трансгенной экспрессии потенциальных TSG с помощью вектора рЕТЕ in vitro и in vivo .
3.5.4.3. Анализ экспресии потенциальных TSG при помощи ПЦР в реальном времени .
3.6. Мутационный анализ TSG
3.6.1. Мутации в гене RASSF
3.6.2. Мутации в гене RBSP в первичных опухолях и экспериментальных опухолях у SCID мышей
3.6.2.1. Частота мутациий RBSPA и В in vivo и in vitro .
3.6.3. Частота мутаций в других генах .
3.6.4. Биоинформационный анализ EST для генов RASSF и RBSP
3.6.4.1. Мотивы - мишени в генах RASSFA и RBSP .
3.6.5. Поиск инициирующих (основных) мутаций в гене RASSFA в клонах полученных из единичной клетки
3.6.6. Ингибирования роста опухолей мутированными RASSFA и
RBSP
3.6.7. Возможный механизм образования гипермутаций в генах RASSF и RBSP
3.6.8. Синергический эффект локусов LUCA и AP
3.7. NotI-микропанели для обнаружения TSG
3.7.1. Приготовления NotI-микропанелей .
3.7.2. Использование NotI-микропанелей для идентификации изменений в районах генов, потенциально участвующих в развитии рака шейки матки, рака почки и рака яичников
ГЛАВА 4. АНАЛИЗ И ОБОБЩЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ .
ВЫВОДЫ
СПИСОК
- Київ+380960830922