ЗМІСТ
ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
ВСТУП . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
РОЗДІЛ
ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ
1.1. Системи транспортування Са+ у гладеньком'язевих клітинах . . . .
1.1.1. Системи енергонезалежного (пасивного) транспортування іонів Са . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.1.1. Кальцієві канали плазматичної мембрани . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.1.2. Тrp канали - канали транзієнтних рецепторних потенціалів . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.1.3. TrpC канали (canonical) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.1.4. Кальцієві канали саркоплазматичного ретикулума . . . . . . . . .
1.1.1.5. Шляхи вивільнення Са+ з мітохондрій . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.2. Системи енергозалежного (активного) транспортування іонів Са . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.2.1. Кальцієва помпа плазматичної мембрани . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.2.2. Na+/Ca+ обмінник плазматичної мембрани . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.2.3. Кальцієва помпа саркоплазматичного ретикулума. . . . . . . .
1.1.2.4. Система акумуляції іонів Са у мітохондріях . . . . . . . . . . . . . .
1.1.3. Функціональна роль Са+ - транспортувальних систем . . . . . . .
1.2. Окситоцин - як фактор регуляції скоротливої активності гладеньких м'язів матки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.2.1. Утеротонічна дія окситоцину . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.2.2.Молекулярна основа дії окситоцину та контроль внутрішньоклітинної концентрації іонів кальцію . . . . . . . . . .
1.2.3. Окситоцин та ємніснооперований вхід Са+, роль у контролі внутрішньоклітинного рівня іонів кальцію у міометрії . . . . .
1.3. Споживання алкоголю та системи транспортування Са+ . . . . . . . .
1.3.1. Загальні уявлення щодо впливу етанолу на фізико-хімічні та метаболічні процеси в організмі . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.3.2. Вплив етанолу на структурно-функціональні властивості біологічних мембран . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.3.3. Вплив етанолу на обмін Са+ у тканинах . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.3.4. Алкоголь та скоротлива функція матки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.4.Підсумки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
РОЗДІЛ
МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
2.1. Реєстрація ізометричного скорочення препаратів гладеньких м'язів . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.2. Клітинні культури . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.2.1. Характеристика культури міометрія жінок . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.2.2. Одержання суспензії клітин міометрія вагітних жінок та створення клітин лінії РНМ- . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.2.3. Характеристика клітин лінії РНМ- . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.2.4. Клітинні лінії, що використовувались для проведення трансфекції та Вестерн блот аналізів . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.3. Оптичні методи вимірювання внутрішньоклітинної концентрації іонів кальцію. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.3.1. Експериментальна установка . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.3.2. Характеристика та властивості Са+-чутливого флуоресцентного зонду Fura- AM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.3.3. Вимірювання внутрішньоклітинної концентрації кальцію . . . . .
2.4. Надекспресія hTrpC у клітинах лінії РНМ . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.5. Одержання mRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.6. Полімеразна ланцюгова реакція . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.7. Вестерн блот аналіз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.8. Метод одержання фракції плазматичних мембран міометрія свині . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.8.1. Одержання фракції плазматичних мембран . . . . . . . . . . . . . . . .
2.8.2. Характеристика фракції плазматичних мембран . . . . . . . . . . .
2.9. Метод реєстрації енергозалежного транспортування Са+ у везикулах плазматичних мембран за умов дії окситоцину . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Реєстрація активності Na+/Ca+-обмінника у везикулах плазматичних мембран . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Реєстрація Са+,Mg+-АТРазної активності у везикулах плазматичної мембрани . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Дослідження пасивного транспортування Са+ у везикулах сарколеми міометрія свині . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Одержання фракції мітохондрій . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Реєстрація обміну Ca+ у фракції мітохондрій . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Очищення та реконструкція Са+,Mg+-АТР-ази сарколеми міометрія свиней . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Реєстрація активності очищеної Са+,Mg+-АТР-ази сарколеми міометрія свиней . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Реєстрація транспортування Са+ у протеоліпосомах з реконструйованою Са+,Mg+-АТР-азою сарколеми міометрія свиней . .
2 Метод одержання суспензії міоцитів матки невагітних щурів . . .
2 Методи визначення Са+-транспортувальної активності мітохондрій та саркоплазматичного ретикулума у суспензії міоцитів матки невагітних щурів . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Експериментальні моделі для дослідження впливу етанолу . . . . . .
2 Методи кінетичного та статистичного аналізу . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 Матеріали та реактиви . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕНЬ
РОЗДІЛ 3. Trp-канали (канали транзієнтних рецепторних потенціалів) - молекулярна мішень дії окситоцину у гладеньких м'язах матки . . . . .
3.1. Дія окситоцину на гладенькі м'язи матки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.2. Обговорення . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.3. Встановлення зв'язку між дією окситоцину та активністю Trp каналів у гладеньком'язевих клітинах матки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.4. Експресія Trp mRNA у міометрії вагітних жінок та у клітинній лінії РНМ- . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.5. Експресія TrpС білків у міометрії вагітних жінок та у клітинній лінії РНМ- . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.6. Обговорення . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.7. Висновки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
РОЗДІЛ 4. Вивчення властивостей ємнісно-оперованого входу кальцію у клітини міометрія; вплив надекспресії hTrpС на кінетику входу Са+ до гладеньком'язевих клітин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.1. Вхід Са+ у клітини міометрія після активації hTrpС каналів . . . .
4.2. Надекспресія hTrpС білків збільшує вхід іонів кальцію у клітини РНМ- після спустошення саркоплазматичного ретикулума . . . . . .
4.3. Регуляція експресії TrpС mRNA та входу Са+ у клітини міометрія . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.4. Обговорення . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.5. Висновки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
РОЗДІЛ 5. Дія діацилгліцеролу на внутрішньоклітинний гомеостаз Са+ у міометрії . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.1. Діацилгліцерол-індукований вхід Са+ до клітин міометрія . . . . .
5.2. Осциляції внутрішньоклітинної концентрації Са+ у клітинах міометрія, що спричинені OAG, залежать від входу позаклітинного кальцію . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.3. Інгібітор ліпази діацилгліцеролу збільшує амплітуду та тривалість
осциляцій внутрішньоклітинної концентрації Са+ . . . . . . . . . . . . . . . .
5.4. Ефекти OAG не опосередковуються вивільненням Са+ з саркоплазматичного ретикулума чи інгібуванням протеїнкінази С . .
5.5. Обговорення . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.6. Висновки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
РОЗДІЛ 6. Дія окситоцину та інших фармакологічних модуляторів на системи Мg+,АТР-залежного транспортування іонів Са в мембранних структурах гладеньких м'язів матки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.1. Вплив окситоцину на транспортування Са+ у фракції везикул сарколеми міометрія . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.2. Утеротонічна дія сигетину та його вплив на Mg+,АТР-залежне транспортування та стаціонарний обмін Са+ крізь сарколему міометрія . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.3. Обговорення . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.4. Висновки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
РОЗДІЛ 7. Дія окситоцину на енергозалежну акумуляцію іонів Са у внутрішньоклітинних кальцієвих депо міометрія . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.1. Суспензія клітин міометрія та накопичення Са+ у саркоплазматичному ретикулумі міоцитів . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.2. Властивості Са+-акумулюючої системи саркоплазматичного ретикулума клітин міометрія . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.3. Чутливість Mg+,АТР-залежної помпи саркоплазматичного ретикулума міометрія до дії окситоцину . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.4. Са+-акумулююча система мітохондрій . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.5. Каліксарени як ефектори обміну Са+ у мітохондріях. . . . . . . . . . . .
7.6. Обговорення . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.7. Висновки. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
РОЗДІЛ 8. Зміни внутрішньоклітинного кальцієвого гомеостазу у міоцитах матки за умов вживання алкоголю . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.1. Акумуляція іонів Са у мітохондріях за модельних умов . . . . . . . . .
8.2. Акумуляція іонів Са в саркоплазматичному ретикулумі за модельних умов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.3. Порівняльне дослідження та кінетична характеристика процесів акумуляції іонів Са у внутрішньоклітинних мембранних структурах за модельних умов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.4. Порівняльне дослідження та аналіз впливу окситоцину на Mg+, АТР-залежну акумуляцію іонів Са в саркоплазматичному ретикулумі за модельних умов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.5. Обговорення. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.6. Висновки. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
ЗАКЛЮЧНИЙ
РОЗДІЛ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
ВИСНОВКИ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
СПИСОК
- Київ+380960830922