ГЛАВА 2. ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ НАКОПЛЕНИЯ, ВЫДЕЛЕНИЕ И ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЧИНЫ ВЕСЕННЕЙ И ЧИНЫ НУТОВОЙ
2.1. Предварительное химическое изучение травы чины весенней и чины нутовой
Сырьем для исследования служила трава чины нутовой, заготовленная во время
цветения в апреле-мае 2001-2002 гг в Иордании, и трава чины весенней, собранная
в Харьковской области в мае-июне 2001-2002 гг во время цветения. Сырье
высушивали на воздухе в тени. Для определения основных групп биологически
активных соединений указанных видов чины нами были использованы водные и
спирто-водные извлечения. Предварительный анализ проводили методом качественных
реакций на исследуемые классы соединений, хроматографии на бумаге и в тонком
слое сорбента. По 15,0 измельченного воздушно-сухого сырья каждого образца
экстагировали при нагревании 10-кратным количеством 70% этанола; извлечения
упаривали до водного остатка (7 мл), осадок отфильтровывали. Полученные таким
образом экстракты исследовали на присутствие различных групп природных веществ
[31,32].
Результаты приведены в таблице 2.1.
Таблица 2.1.
Предварительное изучение чины нутовой и чины весенней
на содержание различных групп БАВ
Исследуемый
образец
Флавоноиды
Кумарины
Сапонины
Производные
коричной
кислоты
Азот-содержащие
соединения
Чина нутовая
1.1.
1.2.
1.3.
+ +
+ +
+ +
+
+ +
+ +
+ +
Чина весенняя
2.1.
2.2.
2.3.
+ +
+ +
+ +
+
+
Примечание: + содержание в незначительном количестве
+ + содержание в значительном количестве
2.1.1. Обнаружение флавоноидов
Цианидиновая реакция. К 1 мл экстракта прибавляли магниевую стружку и несколько
капель концентрированной хлористоводородной кислоты. Появилось розовое
окрашивание, затем содержимое разбавляли водой (1:1) и прибавляли 1 мл
изоамилового спирта [92].
Во всех изучаемых образцах наблюдалось появление розового окрашивания, особенно
интенсивного в образцах чины нутовой. При разбавлении водой наблюдалась более
интенсивная окраска водного слоя, что свидетельствует о преобладании
флавоноидных гликозидов.
Реакция с раствором основного ацетата свинца – к 1 мл извлечения добавляли 5
капель 2% раствора основного ацетата свинца. Появление желто-оранжевого
окрашивания свидетельствовало о наличии флавоноидов [19, 68, 109].
Хроматографирование исследуемых образцов проводили методом двумерной бумажной
хроматографии в системах: I- н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2); II - 15%
уксусная кислота. Наличие данной группы соединений устанавливали в УФ-свете до
и после обработки парами аммиака, 10% раствором хлористого алюминия. Обнаружены
флавоноидные соединения в обоих видах чины, которые предварительно можно
отнести к моно- и дигликозидам флавонов, флавонолов, изофлавонов и их
агликонам. Наиболее богаты флавоноидными соединениями образцы чины нутовой
[111, 131, 157].
Схемы двумерных бумажных хроматограмм приведены на рисунке 2.1.
2.1.2. Обнаружение кумаринов
Для обнаружения указанной группы соединений в исследуемых образцах использовали
следующую реакцию: 1 мл исследуемых экстрактов смешивали с 2 мл смеси жидкого
фенола и уксусного ангидрида (1:10), добавляли 1 мл 70% йодистоводородной
кислоты. Смесь нагревали в течении 1 часа при температуре 1300С, затем выливали
в 5 мл холодной воды и экстрагировали 6 мл хлороформа. Извлечение промывали 1%
раствором карбоната натрия, затем 2% хлористоводородной кислотой,
дистиллированной водой, упаривали до 0,5 мл и хроматографировали в системе
петролейный эфир-формамид (25%) с достоверным образцом кумарина [21, 24].
Рис. 2.1. Схема двумерных хроматограмм на бумаге спирто-водных
экстрактов чины весенней (А), чины нутовой (Б)
Системы растворителей:
I – н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2);
II – 15% уксусная кислота;
* вещества, отнесенные к флавоноидам.
** вещества, отнесенные к оксикоричным кислотам.
Приведенная выше методика обнаружения кумаринов позволяет установить наличие
кумаринового скелета в смеси соединений без предварительной очистки [38, 43,
60, 163].
Установили наличие кумаринов в незначительном количестве в изучаемых видах
чины. Кумарины в чине нутовой обнаружены впервые.
2.1.3. Обнаружение сапонинов
Для обнаружения сапонинов с экстрактами исследуемых видов проводили цветные
реакции Сальковского, Лафона, с ванилином и концентрированной серной кислотой,
а также реакции осаждения – с холестерином, ацетатом свинца [152].
Для хроматографического обнаружения сапонинов использовали метод тонкослойной
хроматографии на пластинках "Сорбфил" в системе растворителей
бензол-метанол-вода (2:2:1) с проявлением парами йода, а также методом
хроматографии на бумаге в системе бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2) с
последующим проявлением 15% раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты [109].
В обоих видах обнаружено незначительное количество сапонинов тритерпеновой
группы.
2.1.4. Обнаружение производных оксикоричной кислоты
Для обнаружения этой группы биологически активных соединений полученные
экстракты обрабатывали хлороформом, затем этилацетатом. Полученную фракцию
хроматографировали в системе н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2) и 15%
раствор уксусной кислоты. Хроматограммы обрабатывали 3% раствором хлорида
железа, реактивом Бартона, диазотированным n-нитроанилином [17, 61].
Обнаружено в чине весенней 2, а в чине нутовой 3 производных коричной кислоты,
которые хроматографированием с достоверными образцами были отнесены к
феруловой, кофейной и хлорогеновой кислотам.
Обнаруженные вещества представлены на рисунках 2.1. и 2.2.
2.1.5. Обнаружение азотсодержащих соединений
Для обнаруже
- Київ+380960830922