ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
В эксперименте исследования проведены in vivo и в условиях модельной системы.
Использованы кролики породы Шиншилла массой 2,8-3,2 кг, половозрелые особи в возрасте 4 месяцев, содержащиеся в стандартных условиях вивария в течение эксперимента. Всего использовано 65 кроликов.
Работу с экспериментальными животными проводили в соответствии с требованиями, изложенными в "Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с экспериментальными животными", предложенными Советом международных медицинских организаций в 1985 г., разработанным на их основе приложении к Приказу Министерства здравоохранения СССР № 755 от 12.08.1987 г. "О мерах по дальнейшему совершенствованию форм работы с использованием экспериментальных животных".
In vitro были использованы глаза кроликов, всего 57 глаз.
У лиц с возрастной катарактой (213 чел.) и волонтеров (65 чел.) для определения исследуемых биохимических параметров использовали плазму крови, а также хрусталики после экстракции катаракты (43 хрусталика) и в результате энуклеации глаз по поводу новообразований орбиты (11 хрусталиков).
2.1. Характеристика клинических признаков возрастной катаракты и соматического статуса обследуемых больных
Проведено комплексное обследование 213 человек (50-65 лет, средний возраст 58 лет), которые находились на диспансерном учете по поводу возрастной катаракты в консультативной поликлинике Института глазных болезней и тканевой терапии им. В.П. Филатова АМН Украины, и 65 добровольцев (45-65 лет, средний возраст 55 лет) с остротой зрения 1,0 с коррекцией или без коррекции, у которых отсутствовали изменения в хрусталиках, подтвержденные биомикроскопически.
У больных проведено офтальмологическое обследование и биохимические исследования крови при развитии катаракты, а также хрусталиков, полученных при экстракции катаракты.
Обследованы больные с разными клиническими формами катаракты - ядерная (58 чел.), субкапсулярная (49 чел.), смешанная (56 чел.), на разных стадиях развития - начальная (50 чел.), зрелая (163 чел.) катаракта и с различной скоростью прогрессирования патологического процесса - медленно (81 чел.), быстро (82 чел.) развивающаяся катаракта.
Среди пациентов с катарактой было 50 человек (50 глаз) с ревматоидным артритом и 33 соматически здоровых по результатам обследования терапевтом-геронтологом (33 глаза).
У всех больных проводили сбор анамнеза, заполняя анкеты пациента, в которых отмечали ряд данных, в том числе: вид трудовой деятельности, место жительства, перенесенные ранее и в настоящее время заболевания, операции, профессиональные вредности, вредные привычки, характер питания, данные о наследственности.
2.2. Методы обследования больных возрастной катарактой и здоровых лиц
2.2.1. Методики офтальмологического обследования
Офтальмологическое обследование лиц с возрастной катарактой проводилось каждые 3-6 месяцев с использованием общепринятых клинических методов по унифицированной схеме - определение остроты зрения для дали и близи без коррекции и с коррекцией по таблицам Головина-Сивцева, измерение внутриглазного давления, определение поля зрения, рефракции, осмотр прямым офтальмоскопом, биомикроскопия на щелевой лампе К. Цейсс, Йена.
2.2.2. Характеристика больных, обследованных прямым компенсаторным методом
С помощью данного метода обследовано 83 больных с возрастной катарактой и 34 человека с прозрачными хрусталиками. Принцип метода и методика исследования представлены в разделе 2.3.
2.2.3. Биохимические исследования крови у здоровых лиц и больных возрастной катарактой, а также хрусталиков, полученных при экстракции катаракты
Так как всем обследуемым пациентам по тем или иным причинам были назначены серологические исследования, оказалось возможным использовать часть крови для проведения биохимического исследования у здоровых лиц и больных возрастной катарактой.
Биохимические исследования крови проведены у 163 больных возрастной катарактой и 32 здоровых лиц (средний возраст 58 лет). Кроме того, исследовано 54 хрусталика, из которых 11 - прозрачные (получены после энуклеации глаза по поводу новообразования в отделении онкологических заболеваний и микрохирургического лечения Института глазных болезней и тканевой терапии им В.П. Филатова АМН Украины), 43 - катарактальные хрусталики (получены после экстракции катаракты в отделении микрохирургического лечения катаракты). В обследуемой группе были больные с ядерной, субкапсулярной и смешанной формами возрастной катаракты, а также с быстрым и медленным ее прогрессированием (развитие помутнений в течение 2 и более 3 лет соответственно).
В плазме крови, а также хрусталиках, полученных при экстракции катаракты, определяли общую протеолитическую и антипротеолитическую активность. Протеолитическая активность определена в плазме крови 160 больных с возрастной катарактой: у 55 пациентов с ядерной формой (из них 29 чел. с быстрым прогрессированием, 26 - с медленным), 49 - субкапсулярной (из них 24 чел. с быстрым прогрессированием, 25 - с медленным), 56 - смешанной формой заболевания (из них 29 чел. с быстрым прогрессированием, 27 - с медленным). Активность ингибиторов протеаз исследована у 163 пациентов: у 58 больных с ядерной формой катаракты (из них 29 чел. с быстрым прогрессированием, 29 - с медленным), 49 - субкапсулярной (из них 24 чел. с быстрым прогрессированием, 25 - с медленным), 56 - смешанной формой (из них 29 чел. с быстрым прогрессированием, 27 - с медленным).
Протеолитическая активность и уровень ингибиторов протеаз определены также в 43 хрусталиках, полученных после экстракции катаракты: из них 11 - с ядерной формой, 11 - субкапсулярной и 21 - смешанной формой заболевания.
2.3. Методика оценки степени помутнения хрусталика прямым компенсаторным методом [190, 193]
Принципом метода является визуальное сравнение двух источников света,