ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для решения поставленных задач были проведены экспериментальные исследования на 204 глазах 102 кроликов с моделированным стандартным тяжелым химическим (щелочным) ожогом роговицы и клинические исследования - на 192 глазах 96 больных, в т.ч. с ожогами глаз различной степени тяжести и этиологии на 149 глазах и на 43 здоровых (парных глазах).
2. 1. Материал и методы экспериментальных исследований
2. 1. 1. Содержание и объем исследований
В эксперименте для решения поставленных задач проводились следующие исследования:
1. Изучение содержания общего белка, свободного аминного азота и уровня общей протеолитической активности в роговице, влаге передней камеры и плазме крови в динамике ожогового процесса с целью определения их значения в изучении патогенеза ожогового процесса в глазу, возможного диагностического и лечебного применения электроэлиминации при ожогах глаз. Исследования проведены на 54 обожженных левых глазах 54 кроликов и на 6 здоровых глазах 3 кроликов.
2. Изучение влияния электроэлиминации (ЭЭ) на содержание общего белка, свободного аминного азота и уровня общей протеолитической активности в обоженной роговице и динамики накопления их содержания в электроэлиминате и оценка значения полученных данных для изучения патогенеза ожогов глаз, диагностической ценности исследования элимината и лечебного воздействия ЭЭ на течение ожогового процесса в глазу. Исследования проведены на 54 обожженных правых глазах 54 кроликов.
3. Изучение динамики содержания общего белка, свободного аминного азота и уровня общей протеолитической активности в обожженной роговице без и после электроэлиминации и в элиминате в течение первых суток после ожога с целью определения возможности применения ЭЭ для неотложной помощи при ожогах глаз. Исследования проведены на 48 глазах 24 кроликов.
4. Изучение влияния ЭЭ на клиническое течение ожогового процесса в глазу у экспериментальных животных. Исследования проведены на 42 глазах 21 кролика.
2.1.2. Моделирование стандартного тяжелого химического (щелочного) ожога роговицы и методики исследований.
Для экспериментальных исследований использовались взрослые кролики примерно одного веса (1900-2500 г) порода шиншилла и фландр, которые находились в одинаковых условиях содержания в виварии института.
Моделирование тяжелого химического ожога роговицы осуществлялась по методике Чечина П. П. и Легезы Г.В. (1968) грузиком тонометра Маклакова 10,0 г для измерения внутриглазного давления, в котором одна из площадок закрывалась тонкой бархатной тканью без ворсинок, закрепленной по краям площадки зажимным кольцом. После нанесения на ткань 2-3 капель 10% едкого натрия и полного и равномерного ее пропитывания щелочью, грузик как при измерении ВГД устанавливался на роговицу кролика после эпибульбарной анестезии 0,25% раствором дикаина и фиксации глазного яблока. Экспозиция контакта грузика с роговицей составляла 10 сек. После этого глазное яблоко и конъюнктивальная полость в течение 1 мин обильно промывалось из шприца дистиллированной водой. В области нанесения ожога в роговой оболочке образовывалось интенсивное помутнение роговицы диаметром 10,0 мм по типу "фарфоровой пластики", что соответствует 9-10 степени помутнения по шкале В.В. Войно-Ясенецкого. В конъюнктивальный мешок инстиллировался 30% раствор сульфацила натрия. При осмотре через сутки интенсивность помутнения роговицы имела вид интенсивного "матового стекла", что соответствовало 7-8 баллам по шкале В.В. Войно-Ясенецкого. Таким образом, получался стандартный ожог роговицы III Б степени тяжести по классификации Н.А. Пучковской и В.М. Непомящей (1973). Ожог вызывали на обоих глазах: правые глаза были опытными, левые - контрольными. С целью предупреждения инфекции в оба глаза на протяжении всего опыта инстиллировали 30% раствор сульфацила натрия 2-3 раза в день.
Через 1, 3, 7, 14, 21, и 30 суток у животных инсулиновым шприцем производился забор влаги передней камеры в объеме 0,3-0,5 мл и 5,0 мл крови из ушной вены. Часть животных после этого выводилась из опыта путем воздушной эмболии после этаминал-натриевого наркоза, и глаза энуклеировались для биохимических исследований роговиц.
Для определения исходного уровня (нормы) изучаемых биохимических параметров на 6 здоровых глазах 3 кроликов был произведен забор влаги передней камеры, плазмы крови и роговиц.
Одновременно в указанные выше строки проводилось наблюдение за динамикой основных признаков течения ожогового процесса с их письменной регистрацией. Наблюдение за динамикой ожогового процесса осуществлялось при помощи следующих методов: осмотра при боковом и фокальном освещении, флюорецентной пробы, биомикроскопии и фоторегистрации глаза.
Регистрация состояния клинической картины производилась по модифицированной нами методике В. М. Непомящей (1973) в течении 3 месяцев в указанные выше сроки. Оценивались следующие признаки ожогового процесса:
- степень выраженности воспалительной реакции переднего отдела глаза по трехбалльной системе (слабая - 1 балл, умеренная - 2 и выраженная - 3 балла) и ее длительности;
- размеры эрозии роговицы (в мм средней величины вертикального и горизонтального диаметров) и сроки начала и завершения эпителизации;
- сроки начала и выраженности васкуляризации роговицы в баллах (слабая - 1 балл, умеренная - 2 и выраженная - 3 балла);
- интенсивность помутнения по шкале В.В. Войно-Ясенецкого;
- наличие осложнений (инфильтраты, истончение роговицы, экссудация в переднюю камеру, гипопион).
Методика электроэлиминации в эксперименте.
После фиксации кролика в станке и анестезии глаза 0,25% раствором дикаина в глазную щель правого глаза вставлялась глазная ванночка и устанавливалась плотно на роговицу по центру. В качестве индифферентной жидкости в ванночку заливался физраствор. Затем в ванночку вводился активный электрод с отрицательным полюсом постоянного тока. П