ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материал исследования
Изучаемым материалом исследования являлась кровь правой половины сердца от 219 трупов людей в возрасте от 16 до 60 лет, которые были подвергнуты судебно-медицинскому вскрытию в Луганском областном бюро судебно-медицинской экспертизы в период с 1997 по 2000 год. Забор крови производили в различные сроки после смерти - от 6 до 72 часов. Взятую кровь хранили в холодильнике при температуре +4 - +6 ?С. Пол и возраст погибших представлены в таблице 2.1.
Таблица 2.1
Распределение трупного материала по возрасту и полу
Возрастная группаПолВсегоМужчиныженщины16-2052721-303033331-403584341-5061117251-60541064Итого18534219
Таким образом, наибольшее число погибших мужчин приходилось на возрастные группы от 41 до 60 лет. Среди исследованных трупов лиц женского пола в этой группе было 11. Такое распределение погибших по полу и возрасту в целом характерно для судебно-медицинского секционного материала, т.е. отвечает картине распространённости случаев смерти применительно к полу погибших.
Характеристика исследуемого материала по причинам смерти, роду, полу представлена в таблице 2.2.
Таблица 2.2
Распределение исследуемого материала по
причинам смерти, роду, полу
Причина смертиПолВсегомужчиныженщиныповешение14321164удавление петлёй15621удавление руками16319комбинированная травма (травма головы и удавление петлёй)11415Всего18534219
Из табл. 2.2 следует, что причиной смерти в наибольшей группе погибших является смерть от повешения. В эту группу вошли материалы исследования 143 трупов мужчин и 21 трупа женщин. Причиной смерти остальных людей явилась смерть от удавления петлей - соответственно 15 мужчин и 6 женщин, от удавления руками - 16 случаев мужчин и 3-х женщин, от комбинации удавления петлёй и черепно-мозговой травмы 11 мужчин и 4 женщины. Значительная часть погибших, особенно мужчины, в момент смерти находились в состоянии алкогольного опьянения, что было подтверждено судебно - токсикологическими исследованиями крови и мочи. Концентрация алкоголя в крови колебалась в пределах от 0,5 0/00 до 1,5 0/00.
Таблица 2.3
Количественная характеристика проведенных иммунологических исследований в зависимости от вида странгуляционной асфиксии и давности смерти
ДНС
(в часах)Механическая странгуляционная асфиксияИтогоПовешениеУдавление петлёйУдавление рукамиКомбинация удавления петлёй и ЧМТ636121212729521616201041288162024148241083224321964821620162427660136121212172722088844Итого6561161081321012
Как видно из табл. 2.3, всего нами произведено 1012 определений иммунологических показателей - способности к розеткообразованию лимфоцитов крови.
2.2. Методы исследования
При выполнении работы нами были освоены иммунологические методики, которые широко применяются в медицине для диагностики и лечения больных.
2.2.1. Выделение лимфоцитов трупной крови.
Выделение лимфоцитов из трупной крови производили по методу Bojum (1990) в нашей модификации. Суть методики заключается в следующем: в пробирку с кровью добавляют среду 199 в пропорции 1:2, содержимое пробирки с помощью пастеровской пипетки хорошо перемешивают, наслаивают на уротраст, плотность которого 1,077 г/мл, после чего центрифугируют в течении 20 минут при 1000 оборотах в минуту. Далее надосадочную жидкость сливают, лимфоцитарный остаток ресуспендируют в 1 мл среды 199, перед использованием суспензии лимфоцитов проверяют их жизнеспособность. Для этого берут равные объёмы 0,1% раствора водного эозина в растворе Хенкса и 0,1% раствора трепанового синего, перемешивают и перед исследованием 1-2 капли полученного раствора добавляют к капле суспензии клеток, которые затем помещаются в камеру Горяева. Окрашенные (мёртвые) клетки пересчитывают на 100 клеток в поле зрения. При правильной обработке процент мёртвых клеток не должен превышать трёх.
2.2.2. Определение активности к розеткообразованию В-лимфоцитов.
Для определения активности В-лимфоцитов крови к розеткообразованию была использована методика, предложенная Чернушенко Е.Ф. и Когосовой Л.С. (1978), которую впервые применил для исследований иммунных показателей трупной крови Костылев В.И. (авторское свидетельство N 1202554 от 8.09.1985 года). Для проведения реакции необходимы: среда 199, эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, комплемент сухой (мышиный). Эритроциты барана отмываются 2 раза средой 199 (центрифугируются 5-10 мин при 1500 об/мин) и готовится 2 % взвесь (0,02 мл осадка отмытых эритроцитов барана и 1 мл среды 199). К 1 мл 2 % взвеси эритроцитов барана добавляется 1 мл разведенной (1:3000) гемолитической сыворотки (0,01 мл гемолитической сыворотки с добавлением 3 мл среды 199), перемешивается и помещается в термостат на 30 мин при +37 0С. После этого взвесь отмывается 2 раза средой 199. Надосадочная жидкость сливается; к осадку эритроцитов барана добавляется 2 мл среды 199. К 2 мл гемолитической системы добавляется 0,1 мл мышиного комплемента. Смесь помещается в термостат на 30 мин при +37 0С, затем дважды отмывается средой 199 (5 мин 1500 об/мин), сливается надосадочная жидкость и доводится средой 199 до 2 мл. В пробирку помещается 0,1 мл раствора приготовленной гемолитической системы и 0,1 мл отмытых лимфоцитов. Выдерживается смесь в пробирке при комнатной температуре 5 мин, помещается в термостат на 15-20 мин +37 0С, центрифугируется 5 мин при 800-850 об/мин. Клетки переводятся во взвесь и подсчитываются в камере Горяева.
2.2.3. Определение активности к розеткообразованию Т-лимфоцитов.
Активность Т-лимфоцитов крови к розеткообразованию определяли методом, описанным Jondal с соавт. (1972) [Ошибка! Закладка не определена.]. В этих целях к 0,1 мл суспензии лимфоцитов добавляют равный объём 0,5% суспензии эритроцитов барана. Соотношение эритроцитов и лимфоцитов не должно превышать 50:1. Полученную суспензию выдерживают при комнатной темп