РАЗДЕЛ 2.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
2.1. Материал
Материалом для исследования послужили выборки зеленых лягушек комплекса Rana esculenta - прудовая Rana esculenta L., 1758 (= R. lessonae Сamerano, 1882), озерная R. ridibunda Pallas, 1771, а также их межвидовой гибрид (R. esculenta-R. ridibunda) - из различных типов гибридных популяционных систем территории Украины (REL, RE, LE, E). Выбор опытных участков обусловлен прохождением зон гибридизации зеленых лягушек (Межжерин и др., 2005). Изучены гибридные популяции Среднего Приднепровья, низовий Дуная, равнинного Закарпатья и бассейна Северского Донца (рис. 2.1.).
Среднее Приднепровье. Популяции: REL (п. Новобеличи, Киевская обл., окр. Киева); LE (пгт. Барышевка, Киевская обл., Барышевский р-н и г. Нежин, Черниговская обл., Нежинский р-н) и L (прудовых лягушек) (с. Лесники, Киевская обл., Обуховский р-н).
Низовья Дуная. RE популяция (г. Вилково (Одесская обл., Килийский р-н).
Равнинное Закарпатье. Популяции: RE (с. Цегливка, Закарпатская обл., Ужгородский р-н) и E (с. Минай, Закарпатская обл., окр. Ужгорода).
Бассейн Северского Донца. RE популяция (с. Гайдары, Харьковская обл., Змиевский р-н).
Всего прижизненно исследовано 603 экземпляра зеленых лягушек комплекса Rana esculenta, отловленных из природных популяций после нереста в июне - июле 2002 - 2005 гг. Из них лягушек озерных - 168 экз., прудовых - 160 экз., гибридов - 275 экз. Отлавливали лягушек разного возраста, прошедших метаморфоз. Деления на группы по возрасту не проводили, т. к. после прохождения метаморфоза у амфибий завершается становление иммунной системы (Flajnik et al., 1987).
Рис. 2.1. Типы исследованных популяций зеленых лягушек комплекса Rana esculenta и их распределение на территории Украины.
После проведения экспериментов, животных, за некоторым исключением, выпускали в прежние места обитания. Число исследованных особей по каждому региону и конкретным популяционным системам представлено в табл. 2.1.
Таблица 2.1.
Количество исследованных лягушек Rana esculenta complex по локалитетам и типам популяционных систем
ГодМеста сбораТип популяционной системыЧисло животных
n12342002п. Новобеличи (Киевская обл., окр. Киева)REL33г. Вилково (Одесская обл., Килийский р-н)RE13пгт. Барышевка (Киевская обл., Барышевский р-н)LE14г. Нежин (Черниговская обл., Нежинский р-н)LE92003п. Новобеличи (Киевская обл., окр. Киева)REL61
Продолжение таблицы 2.1.
1234г. Вилково (Одесская обл., Килийский р-н)RE38пгт. Барышевка (Киевская обл., Барышевский р-н)LE22с. Минай (Закарпатская обл., окр. Ужгорода)E152004п. Новобеличи (Киевская обл., окр. Киева)REL79г. Вилково (Одесская обл., Килийский р-н)RE40пгт. Барышевка (Киевская обл., Барышевский р-н)*LE20с. Лесники (Киевская обл., Обуховский р-н)**L50с. Цегливка (Закарпатская обл., Ужгородский р-н)RE162005п. Новобеличи (Киевская обл., окр. Киева)REL38с. Гайдары (Харьковская обл., Змиевский р-н)RE54г. Нежин (Черниговская обл., Нежинский р-н)*LE63с. Лесники (Киевская обл., Обуховский р-н)**L38Всего603
* R-донорами при ксенотрансплантациях служили озерные лягушки из Новобеличей;
** лягушки использовались исключительно в качестве L-доноров при ксенотрансплантациях для популяций RE типа.
2.2. Методы
Поставленные задачи решали применением следующих методов.
2.2.1. Морфологический анализ. Отловленных из природных популяций зеленых лягушек определяли до вида еще в полевых условиях. Морфологический анализ животных проводили по стандартным методикам (Терентьев, 1950; Банников и др, 1977; Руководство по изучению земноводных и пресмыкающихся, 1989; Некрасова, 2002). Сложность заключается в диагностике гибридных форм. Гибриды обладают морфологическими признаками двух родительских видов (Лада, 1995; Ананьева и др., 1998). Для них, как и для прудовых лягушек, характерно наличие дорсо-медиальной полосы и депигментированные горло и брюшко. С другой стороны, для гибридов характерно большое число пятен на спине и конечностях, как и для озерных лягушек (Некрасова, 2002). Поэтому, на практике, диагностика осуществлялась по комплексу наиболее значимых морфометрических и фенетических признаков: промерам задних конечностей, форме внутреннего пяточного (метатарзального) бугорка, окраске нижней стороны тела, окраске резонаторов у самцов. Кроме этого учитывались также отдельные этологические и экологические особенности.
При диагностике зеленых лягушек наибольшую значимость имеют промеры задних конечностей, позволяющие правильно определить до 85% особей (Лада, 1995). У озерной лягушки соотношение длины бедра к длине голени меньше единицы, у прудовой - больше единицы, а у гибридов приблизительно равно ей (рис. 2.2.).
Форма и размер внутреннего пяточного бугорка и размер первого пальца задней конечности (рис. 2.3.) в качестве критерия идентификации лягушек были предложены еще Л. Бергером (1976). Последующие многочисленные исследования подтвердили ценность данного диагностического признака (Gunther, 1974; Банников и др., 1977; Таращук, 1985; Цауне, 1987; Кузьмин, 1999; Некрасова, 2002).
Окраска тела у озерных лягушек варьирует от темно-зеленой до почти черной (Lac, 1959; Rocek, 1974). У прудовых лягушек окраска обычно зеленая, иногда яркая светло-зеленая. Для них характерно наличие брачной окраски и желтого цвета на задних конечностях. Гибридам свойственен промежуточный между родительскими видами тон, а также часто, как и у прудовых лягушек, наличие желтого цвета на задних конечностях (Berger, 1970).
Нижняя сторона тела также пигментирована по-разному. У прудовых лягушек она белая. У озерных имеются многочисленные черные пятна. Окраска нижней стороны тела гибридов варьирует. Она может быть белой или с многочисленными серыми пятнами (Таращук, 1959; Банников и др., 1977; Кузьмин, 1999; Некрасова, 2002). Хорошим критерием служит окраска резонаторов у самцов. У озер