ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Клинические методы исследования.
Комплексная методика обследования включала: тщательный клинический анализ,
биохимическое исследование. Состояние вещества мозга, желудочковые системы,
цистернальные пространства оценивались по данным МРТ.
Клиническое обследование больных проводилось по единой стандартной схеме, и
содержало: сбор и оценку жалоб, анамнеза, объективного и лабораторного
исследований. При сборе анамнеза изучались демографические показатели (пол,
возраст, профессия, место жительства), предполагаемые причины, динамика
развития начальных признаков заболевания, появление новых симптомов до
обращения в клинику. При соматическом обследовании проводилась оценка t* тела,
частоты дыхания, Ps, уровня АД, деятельности сердца, ЖКТ, мочеполовой системы.
Изучение неврологического статуса включало исследование черепных нервов,
двигательной, координаторной, чувствительной и вегетативной систем, речи,
памяти. Для объективизации клинического состояния, выраженности очагового
неврологического дефицита, общемозговых симптомов и оценки динамики клинических
показателей применяли шкалу инсульта Национального института здоровья США
(NIHSS). Степень функционального восстановления определяли по модифицированной
шкале Рэнкина (mRS) и индексу повседневной активности Бартел (BI); нарушения
умственного состояния и эмоционального фона - по MMSE (мини-исследование
умственного состояния) и по опроснику депрессии Бека.
В план обследования также входили лабораторные и инструментальные методы:
клинический анализ крови и мочи, биохимический анализ крови, коагулограмма,
рентгенография органов грудной клетки, ЭКГ, МРТ, УЗДГ. Больные осмотрены
смежными специалистами (терапевт, окулист и др.).
2.2 Биохимические методы исследования.
2.2.1. Исследование коагуляционного гемостаза.
2.2.1.1 Определение активированного частичного тромбопластинового времени.
Проводили исследование с помощью набора реактивов «АЧТВ-тест» фирмы «Ренам»
(Россия).
Принцип метода: при добавлении к цитратной плазме активатора (эллаговая
кислота) и фосфолипидов (сои) время образования сгустка фибрина зависит только
от активности в данной плазме факторов свертывания: I, II, VIII, IX, X, XI,
XII. Тест АЧТВ позволяет выявить функциональную недостаточность всех факторов
внутреннего пути свертывания, а также дефицит прекалликреина (фактора Флетчера)
и высокомолекулярного кининогена (фактора Фитцджеральда).
Ход определения: В кювету коагулометра вносили 0,1 мл раствора АЧТВ и 0,1 мл
исследуемой плазмы. Перемешивали, инкубировали при температуре 37*С в течение 3
минут и затем добавляли прогретый раствор кальция хлористого 0,025 ммоль/л.
Одновременно с добавлением кальция хлористого включали таймер коагулометра и
отмечали время образования сгустка.
2.2.1.2 Определение ПВ.
Проводили по набору реактивов фирмы «Ренам» (Россия) на коагулометре фирмы
«Солар» (Беларусь). Применяли методику Архипова Б.Ф., 1982.
Принцип метода. При добавлении к цитратной плазме ионов кальция и избытка
тканевого тромбопластина время образования сгустка фибрина зависит только от
активности факторов протромбинового комплекса (факторов внешнего пути
коагуляции): II, V, VII, X.
Ход определения: В кювету коагулометра вносили 0,1мл плазмы бедной
тромбоцитами, прогревали 1-2 минуты при температуре 37*С, затем добавляли 0,2мл
тромбопластин-кальциевой смеси, предварительно прогретой при температуре 37*С.
Отмечали время образования сгустка.
Результаты анализа представляли в виде международного нормализованного
отношения. Для этого определяли протромбиновое отношение (ПО).
ПВ больного
ПО = -------------------------------------------------
ПВ контрольной нормальной плазмы
После определения ПО, его возводили в степень МИЧ, в нашем случае она равна 1,1
(указана в маркировке фирмой-производителем).
мич
МНО = ПО
2.2.2. Определение количества интерлейкинов в сыворотке крови.
Для исследования концентраций провоспалительных и противовоспалительных
цитокинов (ИЛ-1в, ИЛ-6, ФНО-б и ИЛ-10) в периферической крови больных ОИИ были
использованы образцы сыворотки, полученные путем центрифугирования в течение 15
минут при 3000 оборотов /мин 4-5мл свернувшейся крови из кубитальных вен и
последующей немедленной эвакуации сыворотки в специальную пластмассовую
закрывающуюся пробирку Eppendorf, которая подвергалась быстрой заморозке и
хранению при температуре ниже – 30*С в течение 1-12 недель. Взятие крови
проводилось в 1-й и 10-й день пребывания в стационаре между 9-14 часами в
положении лежа. Для исследования цитокинов был использован метод твердофазного
иммуноферментного анализа с применением пероксидазы хрена в качестве
индикаторного фермента с использованием наборов реагинов ProCon IL-1в, IL-6,
IL-10, TNF-б согласно методике, предложенной производителем наборов (ООО
«Протеиновый контур», Санкт-Петербург, Россия). Персонал лаборатории
молекулярной диагностики «Вирола» (Лицензия МОЗ Украины №010762 от
17.01.2001г.), выполнявший данные исследования, не имел информации о том, кому
принадлежат образцы. В связи с отсутствием общепринятых нормальных пределов для
исследованных цитокинов для сравнения были взяты сведения из литературы о
содержании изучаемых цитокинов в крови практически здоровых жителей г. Харькова
соответствующего возраста и доноров: ФНО-б до 6,0 пг/мл, ИЛ-1в до 2,5 пг/мл,
ИЛ-6 до 2,0 пг/мл, ИЛ-10 до 20,0 пг/мл.
2.3.Метод МР-томографического исследования.
МРТ выполнялась всем боль
- Київ+380960830922