РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Для досягнення мети дисертаційної роботи у відповідності до поставлених задач дослідження були проведені в експерименті і у клініці.
Метою експериментальних досліджень було вивчення деяких сторін патогенезу НР, особливостей НР при деструктивних процесах різної важкості, доцільності пригнічення НР при деструктивних процесах різної важкості, створення стандартних моделей для вивчення НР і дослідження ефективності пригнічення НР під впливом лікувальних заходів.
Біохімічні дослідження проводилися для вивчення ролі протеїназ у розвитку НР при пошкодженні рогівкового епітелію, а також для вивчення пускових метаболічних механізмів процесу неоваскуляризації.
Метою клінічних досліджень було вивчення особливостей НР при різних захворюваннях рогівки, вивчення ефективності медикаментозних, фізичних та хірургічних методів регуляції пригнічення НР і розробка патогенетично орієнтованих методів лікування захворювань рогівки, які супроводжуються її неоваскуляризацією.
2.1. Експериментальні методи дослідження
Експеримент виконано на 225 кроликах (450 очей) породи шиншила віком 8-12 місяців масою 2,0-3,0 кг, які знаходилися в однакових належних санітарно-гігієнічних умовах і отримували повноцінне збалансоване харчування згідно існуючих вимог.
В експериментальній частині роботи розроблялися моделі для вивчення НР і для вивчення ефективності методів впливу на неї; проводилося дослідження особливостей НР при центральних ізольованих опіках рогівки різної важкості; вивчення доцільності пригнічення НР при деструктивних процесах різного ступеню; вивчення впливу коагуляції новоутворених судин на перебіг центрального ізольованого хімічного опіку різної важкості; вивчення ролі пошкодження кон'юнктиви і рогівкового епітелію для розвитку НР; дослідження впливу імуносупресорів (циклоспорину), гепарину, стероїдних (дексаметазону) і нестероїдних (діклофенаку) протизапальних препаратів на НР при їх місцевому застосуванні; вивчення впливу ТАО на НР на моделях опіку і стерильної виразки рогівки. Розроблялися також критерії і методи оцінки НР з урахуванням особливостей НР при деструктивних процесах різної важкості і локалізації, та врахуванням особливостей патогенетичних механізмів цього патологічного процесу.
Загальний об'єм і зміст виконаних експериментальних досліджень представлено в табл. 2.1.
Таблиця 2.1
Розподіл тварин за групами та експериментальними моделями
Мета експериментуЕкспериментальні групи /
Кількість очейКількість тваринДослідження НР при деструктивних процесах різної важкостіЦентр. ізольований опік сер. ст. / 15
Центр. ізольований опік важкої ст. /1515Вивчення доцільності пригнічення НР при деструктивних процесах різного ступенюОпік середньої важкості; коагуляція судин / 10
Опік середньої важкості; контроль/ 10
Важкий опік; коагуляція судин / 10
Важкий опік; контроль / 10
20Мета експериментуЕкспериментальні групи /
Кількість очейКількість тваринВивчення ролі пошкодження рогівкового епітелію і кон'юнктиви для НРЦентр. ізольований опік рогівки / 16
Центр. опік + деепітелізація / 16
Центр. опік + відсікання к-ви / 16
Периферичний опік рогівки і лімбу/16
Периферичний опік рогівки і к-ви / 1640Вивчення ролі колагенази і желатінази для НР при пошкодженні рогівкового епітеліюДесквамація лімбального епітелію / 10
Десквамація центральної частини рогівкового епітелію / 1010Дослідження впливу циклоспорину-А і дексаметазну на НР на моделі асептичного некрозу рогівкиІнстиляції дексаметазону / 20
Інстиляції циклоспорину / 20
Інстиляції циклоспорину і дексаметазону / 20
Контроль / 2040Дослідження впливу гепарину на НР на моделі опіку рогівкиОпік середньої важкості; ін'єкції гепарину / 15
Опік середньої важкості; контроль/ 15
Важкий опік; ін'єкції гепарину / 15
Важкий опік; контроль / 1530Дослідження впливу наклофу і дексаметазону на НР на моделі проникаючого поранення рогівкиІнстиляції наклофу / 20
Інстиляції дексаметазону / 20
Контроль / 2030Дослідження впливу ТАО на НР на моделі опікуТАО / 20
Контроль / 2020Дослідження впливу ТАО на НР на моделі виразкиТАО / 20
Контроль / 2020
Всього 225 кроликів (450 очей).
2.1.1. Експериментальні моделі для вивчення неоваскуляризації рогівки
Експериментальними моделями захворювань для вивчення НР були хімічні опіки, викликані 10% розчином їдкого натру, різної важкості і різної локалізації; центральний ізольований опік рогівки в комбінації з деепітелізацією і в комбінації з ексцизією кон'юнктиви; асептичний некроз рогівки; стерильна виразка рогівки; проникаюче лімбально-рогівкове поранення.
Хімічні опіки очей викликали різної важкості і локалізації: центральний ізольований опік рогівки різної важкості, периферичний опік рогівки та лімбу і кон'юнктивально-рогівковий опік. Епібульбарну анестезію проводили шляхом закрапування 0,25% розчину дикаїну тричі на протязі 5 хвилин. Опіки викликали 10% розчином їдкого натру. Центральний ізольований опік рогівки викликали методом штампу, розробленим в Одеському НДІ очних хвороб ім. акад. В.П.Філатова. Фільтрувальний папір у вигляді диску діаметром 7 мм намочували в 10% розчині їдкого натру і накладали на центральну частину рогівки на протязі 10 секунд (для моделювання опіку середнього ступеню) і на протязі 20 секунд (для моделювання важкого опіку).
Опік периферичної частини рогівки і лімбу проводили тим же методом, що й опік центральної частини. При цьому штамп переносили на верхню периферичну ділянку рогівки, захоплюючи лімб. Експозиція опіку становила 15 сек.
Кон'юнктивально-рогівковий опік проводили за модифікованим нами методом. Для кращого контакту з поверхнею ока опік рогівки і кон'юнктиви проводили окремо. Спочатку фільтрувальний папір півмісяцевої форми розмірами 5х7 мм намочували в 10% розчині їдкого натру і накладали на верхню частину рогівки і лімб. Експозиція опіку становила 15 секунд. Після опіку рогівки додатково проводили опік сусідньої част