2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений, используемых в работе...............................4
ВВЕДЕНИЕ...............................................................6
1 Литературный обзор..................................................17
1.1 Агглютинационные латексные методы.................................21
1.2 Антигенные латексные диагностикумы................................32
1.3 Антительные латексные диагностикумы...............................35
1.4 Реакция агглютинации латекса при диагностике вирусных заболеваний.. 56
1.5 Значение иммунологических тестов при диагностике туберкулеза......63
2 Собственные исследования............................................79
2.1 Материалы, методы и объемы исследований...........................79
2.2 Результаты исследований...........................................86
2.2.1 Разработка латексного туберкулезного антигенного диагностикума для выявления противотуберкулезных антител (ЛТА)...........................86
2.2.1.1 Выбор латексного носителя.....................................86
2.2.2 Выделение белковой фракции из микобактерий туберкулеза и изготовление диагностикума.............................................89
2.2.2.1 Получение контрольного латексного препарата (КЛ)..............91
2.2.2.2 Изучение способов стабилизации ЛТА............................92
2.2.2.3 Изучение активности ЛТА в зависимости от сроков хранения......95
2.2.2.4 Определение биологической активности и специфичности ЛТА......97
2.2.3 Исследование эффективности РАЛ с сыворотками крови
крупного рогатого скота с использованием ЛТА...................104
2.2.4 Разработка латексного туберкулезного антителыюго диагностикума для выявления комплексных антигенов микобактерий
туберкулеза (ЛТАТ).............................................123
2.2.4.1 Изготовление диагностикума и его стандартизация..............123
2.2.5 Исследование эффективности выявления антигенов микобактерий туберкулеза с помощью ЛТАТ в биологическом материале..................136
3
2.2.6 Разработка способа диагностики туберкулеза крупного рогатого скота
с помощью внутрикожных проб на интактных морских свинках 150
2.2.7 Разработка латексного антительного диагностикума для обнаружения антигенов морбилливируса (ЛЧД).....................................157
2.2.7.1 Изготовление диагностикума ЛЧД.............................160
2.2.7.2 Стандартизация диагностикума...............................161
2.2.8 Клинические испытания ЛЧД....................................166
2.2.9 Разработка латексных диагностикумов, определяющих концентрацию иммуноглобулинов класса 0(ЛД-ап1л 1ёС), А(ЛД-апЦ ^А),
М(ЛД-апД ^М)...............................................171
2.2.9.1 Изготовление ЛД-апй ЛД-апй ^А, ЛД-апй lgM..................172
2.2.10 Использование ЛД-апб 1^, ЛД-апй и ЛД-апй 1§М в клинической
практике.....................................................181
3 Заключение......................................................188
4 ВЫВОДЫ .........................................................207
5 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.......................................212
6 Список используемой литературы..................................214
7 ПРИЛОЖЕНИЕ......................................................281
28
Согласно I I.I lager (302) и J.W. Zolg (427) чувствительность PAJI с использованием турбидиметрического метода регистрации агглютинации МСФ возрастает до 1,0-1,5 пг/10 млк, (если молекулярный вес = 150,000 соответственно IgG), а используемый объем пробы составляет 10 мкл).
E.A.Medcalf с соавт. обращают внимание на интересные свойства очень маленьких МСФ с высоким рефрактивным показателем (для поливинилнафта-лена nD=l,68 vs, а для полистерина nD=l,59 vs). Эти МСФ лучше рассеивают свет, особенно если агглютинация происходит при оптимальном уровне рассеивания (358, 359). D.S.Canncl (257) описывает возможность применения для количественного варианта реакции агглютинации сканирующей лазерной микроскопии, a G.R.Schultness (393) и Т.A.Wilkins (422) отмечают как более чувствительный метод использование угловой анизотропии. Включение в латексные частицы магнитного материала позволяет усовершенствовать РАЛ, что использовали в своей работе N.Nakamura с соавт. (368) и K.Jmai с соавт. (316). Эти же авторы и J.M.Brinkley с соавт. (255) предлагают подсчитывать степень агглютинации методом флюоресценции.
Учет результатов РАЛ можно проводить, фильтруя продукт реакции через мембрану, задерживающую образующееся агглютинаты и пропускающую свободные латексные частицы. Такую модификацию РАЛ предложили
H.Christensen с соавт. (259) и J.W.Stave (404), которые использовали черные и красные МСФ. J.Gibbs с соавт. описали метод постановки РАЛ по схеме ELIZA
29
(291). После реакции с хромогенным субстратом, растворимый цветной продукт реакции измеряется на спектрофотометре для микроплат.
При постановке РАЛ можно использовать хроматографический принцип, иммобилизуя диагностические МСФ на нитроцеллюлозных мембранах. Этот принцип использован в новом тесте на гемоглобин, его чувствительность составила 50нг (243, 242). C.A.Clausan и F.Green описывают стриптовый тест для коричнево-красный гнили дерева при использовании ткани типа «polyester» (261), a M.Sun и F.R.Pfeiffer приводят пример использования МСФ на стрипах при определении лекарственных веществ (405). Эти тесты отличаются стабильностью и легкостью в использовании.
S.Tsuda с соавт. раскрывает перспективы использования новых технологий на основе латексных диагиостикумов для тестирования болезней растений, загрязнения воды, определения качества продуктов (408).
МСФ имеют уникальные свойства благодаря которым область их использования постоянно расширяется. МСФ достаточно мелкие для того, чтобы оставаться в состоянии суспензии в течение часа или больше, а из суспензии их легко выделить центрифугированием, фильтрованием или с помощью магнита. МСФ используются как твердые «подложки» для радиоиммуноисследования.
Примером для твердофазного исследования с помощью МСФ может служить способ очистки кардиоспецифического изоэнзима (лактат дегидрогеназы - LD-1). На МСФ с диаметром 0,8мкм адсорбируются антитела D.8.I. Сенсибилизированные таким образом МСФ смешиваются с сывороткой крови
- Київ+380960830922