2
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АПК - антигенпрезентирующие клетки
АЭЭИ - аминоэтилэтиленимин
БПЛ - бетапропиолактон
ГЛБ - гидрофильно-липофильный баланс
ГОА - гидроокись алюминия
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИББ - инфекционная бурсальная болезнь
ИБК - инфекционный бронхит кур
ИЛТ - инфекционный ларинготрахеит
ИФА- иммуноферментный анализ
Б-ИФА - блокирующий вариант иммуноферментного анализа
КЭ - куриные эмбрионы
НАФ - неполный адъювант Фрейнда
НБ - ньюкаслская болезнь
ПАВ - поверхностно-активные вещества
ПАФ - полный адъювант Фрейнда
ПСП - полусинтетическая питательная среда
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РВТ - реовирусный теносиновит
РДП - реакция диффузной преципитации
РГА - реакция гемагглютинации
РИФ - реакция иммуннофлуоресценции
PH - реакция нейтрализации
РНК - рибонуклеиновая кислота
РСК - реакция связывания комплемента
РТГА - реакция торможения гемагглютинации
СГПК - синдром гидроперикардита кур
ССЯ-76 - синдром снижения яйценоскости-76
ТЦДбо- 50%-ная тканевая цитопатическая доза
ФБР - фосфатно-буферный раствор
ФЭК - фибробласты эмбрионов кур
ЦПД - цитопатическое действие
ХАО - хориоаллантоисная оболочка
ЭИД50 - 50%-ная эмбриональная инфицирующая доза
ЭЭЖ - экстраэмбриональная жидкость
СПФ - свободный от патогенных факторов
мес - месяцы
сут - сутки
ч - часы
1дА - иммуноглобулин А
1дО - иммуноглобулин в
1дМ - иммуноглобулин М
1д - логарифм по основанию десять
1од2 - логарифм по основанию два
3
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
1.1. Эпизоотология при ньюкаслской болезни, инфекционном бронхите кур, синдроме снижения яйценоскости-76, реовирусном теносиновите и инфекционной бурсальной болезни, их специфическая профилактика и оценка её эффективности 11
1.1.1. Ньюкаслская болезнь 11
1.1.2. Инфекционный бронхит кур 16
1.1.3. Синдром снижения яйценоскости-76 19
1.1.4. Реовирусный теносиновит 23
1.1.5. Инфекционная бурсальная болезнь . 26
1.2. Общие принципы конструирования инактивированных вакцин 31
1.2.1. Очистка и концентрирование вирусного сырья при производстве инактивированных вакцин 31
1.2.2. Адъюванты 35
1.2.2.1. Вакцины на основе масляных адъювантов 38
1.2.2.2. Физические свойства вакцин на основе масляных адъювантов 43
1.3. Применение инактивированных вакцин 45
1.3.1. Оценка эффективности применения инактивированных вакцин 48
1.4. Ассоциированные вакцины 51
1.5. Заключение по обзору литературы 57
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 59
2.1. Материалы и методы 59
2.1.1. Материалы исследований 59
2.1.1.1. Производственные штаммы вирусов 59
2.1.1.2. Культуры клеток, утиные и куриные эмбрионы 60
2.1.1.3. Эмульсионные инактивированные вакцины 60
2.1.1.4. Подопытные птицы 60
2.1.1.5. Сыворотки крови 60
2.1.1.6. Питательные среды 60
2.1.1.7. Реактивы и растворы 60
2.1.1.8. Масляные адъюванты и минеральные масла 61
2.1.1.9. Оборудование 61
2.1.2. Методы исследований 62
2.1.2.1. Выращивание однослойной культуры ФЭК 62
2.1.2.2. Культивирование реовируса птиц 63
2.1.2.3. Культивирование вируса НБ 63
2.1.2.4. Культивирование вируса ИБК 64
2.1.2.5. Культивирование вируса ССЯ-76 65
2.1.2.6. Культивирование вируса ИББ 65
2.1.2.7. Определение биологической активности вирусов НБ, ИБК, ССЯ-
76, ИББ и РВТ • 65
2.1.2.8. Инактивация вирусов НБ, ИБК, ССЯ-76, ИББ и РВТ 67
2.1.2.9. Определение оптимальной концентрации инактивированных вирусов НБ, ИБК, ССЯ-76, ИББ и РВТ в ассоциированной вакцине 67
2.1.2.10. Определение оптимального компонентного состава ассоциированной вакцины против НБ, ИБК, ССЯ-76, ИББ и РВТ 68
2.1.2.11. Концентрирование инактивированного вируса ИБК 68
I
16
ассоциированном виде в разных сочетаниях с антигенами вирусов ИБК,. ССЯ-76, реовирусного теносиновита, инфекционной бурсальной болезни (12, 24, 38, 40, 41, 43, 51, 54, 55, 147, 148, 152, 180, 253, 264).
В случае разработки качественной стратегии специфической профилактики удаётся добиваться создания напряжённого иммунитета практически у 100% птиц всех возрастных групп. Для оценки напряжённости иммунитета проводят биопробы или определяют титры антигемагглютининов в РТГА. Схему вакцинопрофилактики можно считать эффективной, если в более 80% проб сывороток крови от цыплят в возрасте до 30 сут антитела выявляются в разведениях от 1:8 и выше, у молодняка до 120 сут - 1:16 и выше, у взрослой птицы - 1:64 и выше. После проведения иммунизации антитела появляются на 7-10-е сут, к 25-30 сут достигают максимума, через 60 сут начинают снижаться, а через 5-6 месяцев регистрируют лишь их следы (51, 54, 55, 152, 191). Высокий уровень антител и сохранение его в течение года и более после однократной иммунизации вирусвакцинами из штаммов В1, Ла-Сота, Г, Вг или инактивированной ГОА-вакциной не могут быть поствакцинальными и свидетельствуют о циркуляции в стаде полевого вируса НБ (43, 92, 108, 110, 138, 165, 195).
1.1.2. Инфекционный бронхит кур
Инфекционный бронхит кур - острое инфекционное заболевание кур, характеризующееся поражением органов респираторного тракта, почек и снижением яйценоскости с ухудшением качества яиц (46, 51, 54, 71, 108, 111,115,150).
ИБК широко распространён по всему миру. В США и Европе наибольшее распространение получили штаммы вируса серотипа Массачусетс, однако выделяют и другие, отличные от североамериканского, серологические типы. Чаще всего вспышки этого заболевания, происходящие в настоящее время среди вакцинированного поголовья, являются результатом инфицирования поголовья птиц
17
штаммами вируса, относящимися к другому серологическому типу (14, 32, 47,49, 55, 71, 108, 111, 150, 178, 221,233).
Возбудитель заболевания относится к роду Коронавирусов семейства Coronaviridae и представлен множеством серотипов, различающихся в антигенном отношении. Классификация штаммов основана на особенностях белка S, которая осуществляется с использованием реакции нейтрализации, моноклональных антител на этот белок, а также анализа гена S с помощью последовательного и ограничительного фрагментального анализа образцов ДНК гена S (71, 107, 108, 109).
Восприимчивость кур к заболеванию варьирует в зависимости от породы и штамма вируса. Тяжелее всего болезнь протекает у молодых цыплят, по мере взросления резистеность возрастает и тяжесть проявления заболевания снижается. У цыплят в возрасте до 6 недель смертность может достигать до 25% и более, а у взрослой птицы она незначительна. Уровень смертности у кур различен и зависит от вирулентности серотипа, состояния иммунитета и наличия стрессов (71, 108, 111, 150, 193, 221, 257).
Источник инфекции - больные и переболевшие цыплята и куры, длительное время остающиеся вирусоносителями и выделяющие вирус во внешнюю среду с истечениями из носа, глаз и с фекалиями. Основные пути заражения в естественных условиях - воздушно-капельный и алиментарный, переносчики не играют роли в передаче вируса. Распространение вируса происходит через инфицированное оборудование птичников и обслуживающий персонал. Характер распространения вируса воздушным путём неизвестен, сообщалось о его переносе на расстояние около километра без участия переносчиков (14, 32, 55, 71, 108, 111, 150, 193, 218, 257).
При возникновении заболевания наблюдаются респираторные симптомы, проявляющиеся затруднённым дыханием, кашлем, чиханием, выделениями и опуханием пазух в некоторых случаях. При инфицировании нефропатогенным штаммом может наступать видимое выздоровление после респираторной фазы с последующим проявлением подавленности, жидкого помёта, жажды и высоким уровнем смертности. Вместе с
- Київ+380960830922