СОДЕРЖАНИЕ
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.....................................6
ВВЕДЕНИЕ..........................................................7
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..............................................12
1.1. Характеристика вспышек ящура вызванных генетически измененным вирусом ящура.....................................12
1.1.1. Вирус ящура типа О № 1685/Московский/1995.............14
1.1.2. Вирус ящура типа О Тайвань 3/1997.....................15
1.1.3. Вирус ящура типа О № 1734/Г1риморский/2000............16
1.1.4. Вирус ящура типа Азия-1, выделенный в России в 2005-2006 гг. .16
1.1.5. Вирус ящура типа Азия-1 №1991/Монголия /2005..........18
1.1.6. Вирус ящура типа А Иран/2005 и А Турция/2006..........18
1.2. Лабораторніїные штаммы вируса яшура типов А и О...........19
1.3. Методы изучения биологических свойств вируса ящура........20
1.3.1. Репродукция вируса ящура в различных клеточных культурах 20
1.3.2. Бляшкообразование вируса ящура........................25
1.3.3. Репродукция вируса ящура в организме лабораторных животных.28
1.3.4. Патогенность вируса ящура для естественно-восприимчивых животных..................................................29
1.3.5. Штаммовая дифференциация вируса ящура серологическими методами..................................................34
1.3.6. Определение антигенного соответствия между вакцинным штаммом и эпизоотическим изолятом в реакции микронейтрплизации .40
1.4. Заключение................................................43
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ......................................46
2.1. Материалы.................................................46
2.1.1. Эпизоотические изоляты и лабораторные штаммы вируса ящура.46
2.1.2. Сыворотки крови.......................................48
2.1.3. Клеточные культуры....................................49
2.1.4. Питательные среды и солевые растворы..................49
2.1.5. Животные..............................................50
3
2.2. Методы исследований.........................................50
2.2.1. Подготовка афтозной суспензии...........................50
2.2.2. Подготовка монослойной клеточной культуры 113-13.8-2....51
2.2.3. Вирусовыделение и репродукция вируса ящура в монослойных клеточных культурах.........................................52
2.2.4. Реакция микронейтрализации (РМН)........................53
2.2.5. Иммуноферментный анализ (ИФА)...........................54
2.2.6. Определение инфекционной активности вируса..............55
2.2.6.1. Определение титра инфекционной активности вируса ящура методом бляшек под агаровым покрытием...................56
2.2.6.2. Определение титра инфекционной активности вируса микрометодом............................................57
2.2.6.3. Определение титра инфекционной активности вируса ящура в КК СП...................................................57
2.2.6.4. Определение титра инфекционной активности вируса ящура
на морских свинках...........................................58
3.2.6.5. Определение титра инфекционной активности вируса ящура
I
по методу Гендерсона.........................................58
2.2.7. Получение гипериммунных сывороток.......................59
2.2.8. Реакция связывания комплемента (РСК)....................59
2.2.9. Заражение естественно-восприимчивых животных............59
2.2.10. Заражение лабораторных животных........................60
2.2.11. Статистическая обработка результатов исследований......60
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.............................60
3.11 Изучение биологических свойств вируса ящура типа А..........60
3.1.1. Репродуктивные свойства лабораторных вариантов вируса ящура типа А22 №550............................................. 60
3.1.2. Бляшкообразующие свойства лабораторных вариантов вируса ящура типа А22 №550.........................................63
3.1.3. Репродуктивные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа А......................................................67
(структурных) белков (УР1, УР2, \ФЗ), образующих антигенные детерминанты вируса яшура. При этом исследователи отмечают, что вирнонные полипептиды (УР1, УР2, УРЗ, УР4) обладают различной способностью изменять свою структуру. В то время как УР1 и УРЗ изменяются довольно быстро, УР4 практически не изменяется. В связи с этим штаммы вируса ящура всех семи серотипов имеют сходную структуру УР4 [13, 137, 1471. Именно вариабельность участка УР1 позволяет вирусу связываться с рецепторами в новых типах клеток и обуславливает возможность размножения на широком круге хозяев. При смене хозяина, системы культивирования или изменении других селективных условий может происходить изменение и некоторых биологических свойств вируса [50, 152, 157]. Как структурные так и неструктурные белки вызывают' выработку антител у животных во время инфекции. Однако у вакцинированных животных обнаруживаются антитела в основном к структурным белкам. Это объясняется тем, что при изготовлении вакцины проводят частичную очистку вируса, в процессе которой большинство неструктурных белков удаляется вместе с клеточным детритом. Поствакцинальные антитела в крови животных определяются начиная с 14 дня, и их количество достигает максимума к 21-28 дню после вакцинации, и сохраняются на том же уровне в течение 3-3,5 месяцев. В лабораторной практике принято определять наличие и количество противоящурных антител в сыворотке крови животных в РМН и ИФА [34, ?5, 41, 95, 156]. Обнаружение антител к неструктурным белкам В Я является важным инструментом контроля за заболеванием, поскольку позволяет дифференцировать вакцинированных животных от переболевших и выявлять бессимптомных вирусоносителей среди вакцинированного поголовья. В настоящее время установлено, что из всех неструктурных полипептидов ВЯ наиболее подходящими для использования в качестве антигена являются белки ЗА, ЗВ и ЗАВ. При определении наличия неструктурных белков в сыворотках крови животных применяется ряд коммерческих тест-систем для ИФА. При этом отмечается возможность определения антител к неструктурным белкам ВЯ уже на 6-7 день после заражения [52, 67, 85, 156].
14
Главным источником инфекции является в первую очередь крупный рогатый скот как самый восприимчивый к ящуру вид животных [86, 123]. Однако в исключительных случаях в отдельных местностях или во время эпизоотий свиньи и МРС могут стать такими же опасными источниками инфекции как и рогатый скот. Опасность ’ переноса возбудителя из энзоотических очагов существует постоянно, вероятно, это объясняет периодическое появление эпизоотий ящура [154, 160, 164].
Основной причиной вспышек ящура в России принято считать занос вируса из соседних неблагополучных государств. В течение последних лет ящур был зарегистрирован на территории России во время или после эпизоотий в Китае (в 1995г. в Московской области; в 2000 и 2005гг. Приморском крае; 2004 - 2006гг. в Амурской области; в 2005г в Хабаровском крас; в 2006г. в Читинской области) [9, 27, 55,121, 122].
1.1.1. Вирус ящура типа О №1685/Московс!сий/1995. В 1995 году на свиноферме племзавода «Петровское» Московской области (г. Лыткарино Люберецкого р-на) была зарегистрирована вспышка ящура, вызванная вирусом типа О, относящимся к генетической группе Гонконг/1993-1995. Предположительно возбудитель был занесен с замороженной свининой из Китая, которая поступила па расположенное рядом мясоперерабатывающее предприятие. Субпродукты мясопереработки поступали на корм свиньям. Заболевание протекало среди невакцинироваиных свиней. Очаг был ликвидирован с помощью вынужденного убоя всей популяции восприимчивых животных с последующим проведением кольцевой вакцинации в угрожаемой зоне [27, 45, 80].
Нуклеотидное секвенирование гена ЗА изолята О №1685/Московский/1995 показало наличие делений в этом участке генома. При определении первичной структуры VP1 обнаружено 97% нуклеотидного родства с изолятами ВЯ типа О, циркулирующими в Китае, Гонконге, Филлипинах, что подтвердило принадлежность изолята к Китайскому топотипу. Выделенный из афтозного материала вирус к 4-5 пассажу был
- Київ+380960830922