2
СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ______________________________________________________5
1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ_____________________________________________12
1.1. Пробиотические препараты на основе бактерий рода Bacillus'. механизм действия и биологические свойства______________12
1.2. Интерфероны: характеристика и биологические свойства_20
1.3. Генетически модифицированные микроорганизмы: экологическая безопасность и перспективы использования в составе пробиотиков_____________________________________________________31
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ____________________________________44
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ___________________________________44
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ______________________________61
2.2.1. Оценка биологических свойств штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 на лабораторных моделях___________________________61
2.2.1.1. Оценка генетической стабильности штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105____________________________________________61
2.2.1.2. Сравнительная оценка антагонистической активности штаммов Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 и Bacillus subtilis 2335_63
2.2.1.3. Влияние штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 на микробиоценоз кишечника цыплят____________________________________66
2.2.1.4. Влияние штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 на гематологические показатели организма здоровых цыплят_____________71
2.2.1.5. Оценка протективной активности штаммов Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 и Bacillus subtilis 2335 в модели экспериментальной сальмонеллезной инфекции цыплят_________________________74
3
2.2.2. Оценка иммуногропных свойств штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105______________________________________________________78
2.2.2.1. Влияние штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 на клеточное
звено иммунного ответа______________________________________78
22.2.2. Влияние штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 на интенсивность гуморального иммунного ответа на тимусзависимый антиген 82
2.23. Влияние штамма Bacillus subtilis 2335/рВ\1В105 на иммунологические, микробиологические и биохимические параметры организма здоровых цыплят______________________________________________________93
2.2.3.1. Влияние штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 на уровень неспецифической резистентности здоровых цыплят________________94
2.2.3.2. Влияние штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 на микробиоценоз кишечника здоровых цыплят_________________________99
2.2.3.3. Влияние штамма Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 на уровень общего белка и его фракций в сыворотке крови___________103
2.2.4. Сравнительная оценка влияния штаммов Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 и Bacillus subtilis 2335 на микробиологические и иммунологические параметры организма цыплят в модели антибиотикоассоциированного дисбактериоза_______________________________________107
2.2.4.1. Влияние штаммов Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 и Bacillus subtilis 2335 на активность сывороточного лизоцима_____109
2.2.4.2. Влияние штаммов Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 и Bacillus subtilis 2335 на бактерицидную активность сыворотки крови 112
2.2.4.3. Влияние штаммов Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 и Bacillus subtilis 2335 на активность и интенсивность фагоцитоза_115
2.2.4.4. Влияние штаммов Bacillus subtilis 2335/рВМВ105 и Bacillus subtilis 2335 на уровень общего белка и его фракций в сыворотке крови 120
16
определяющих персистирующие свойства этих микроорганизмов и их возможность к внутриклеточному паразитированию.
Установлено, что уже на 3-и сутки после перорального введения пробиотика из бацилл в содержимом желудка существенно снижается количество таких микроорганизмов, как Staphylococcus aureus и E.coli. В последующие дни эти микроорганизмы полностью элиминировались из содержимого желудка (106).
Высокая антагонистическая активность бацилл установлена в опытах на белых мышах при стафилококковой, сальмонеллезной, колибактериозной и синегнойной экспериментальных инфекциях. Результаты опытов показали, что внутрибрюшинное введение Bacillus subtilis 534 в дозах 200 млн. м.т./гол, в течение 10 суток, предупреждало заболеваемость и гибель мышей от указанных инфекций с 89,0-100% до 22,2-30,0%, а при назначении препарата внутрь - до 16,7-20,8% (36).
Все описанные выше проявления биологической активности бацилл в желудочно-кишечном тракте носят локальный характер и их воздействие на патологические процессы, развивающиеся в других органах и тканях, имеют ограниченный или опосредованный характер.
Однако, последние данные по изучению механизма действия пробиотиков из бацилл свидетельствуют о том, что помимо локального действия во внутренних открытых полостях макроорганизма, где потенциальными мишенями являются клетки выстилающих слизистых, бациллы могут в течение некоторого времени персистировать в крови, проникая в органы и ткани, осуществляя доставку к ним биологически активных веществ, в частности пептидных антибиотиков (118).
Установлено, что после перорального приема пробиотиков при контакте со слизистой ротоглотки, пищевода и желудка примерно 0,1% от общего числа введенных микробных клеток уже в первые минуты может
17
проникать в кровь, а затем в паренхиматозные органы. Это явление квалифицируется как бессимптомная транслокация.
По мнению некоторых авторов, установивших явление органотканевой транслокации не только бацилл, но и всех микроорганизмов (кишечных палочек, бифидобактерий, лактобактерий и др.), составляющих основу пробиотиков, процесс этот следует рассматривать в качестве одного из начальных звеньев естественного механизма стимулирования неспецифической резистентности макроорганизма в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (38, 106).
Это подтверждается экспериментальными данными: у собак,
получавших перорально препарат на основе Bacillus subtilis, параллельно с процессом транслокации наблюдали повышение фагоцитарной активности нейтрофилов (111).
Существуют работы, указывающие на антитоксическое действие микроорганизмов рода Bacillus. Как известно, одной из особенностей инфекционного процесса, вызываемого некоторыми патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, является воздействие на макроорганизм микробных токсинов. В экспериментах на беспородных и инбредных мышах использовали стафилококковый экзотоксин и сальмонеллезный эндотоксин. Показано, что пероралыюе введение Bacillus subtilis проявляет антитоксическое действие, степень которого зависит от интервала между введением токсина (39).
При этом высказывается предположение, что антитоксическое действие препаратов из бацилл определяется их способностью дезинтегрировать высокомолекулярные белки, что подтверждается также способностью бацилл разрушать гемагглютинины.
В ряде работ показан многосторонний характер иммуномодулирующего действия бацилл на клеточное и гуморальное звено иммунитета. Установлено повышение фагоцитарной активности
- Київ+380960830922