РАЗДЕЛ 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ
Экспериментальная работа выполнялась в период 1998-2003 гг. на землях совхоза
“Радуга” консорциума Укрфитотерапия (с. Лекарственное) Симферопольского района,
расположенного в Предгорной зоне Крыма.
Исследования проводили на семенной популяции сорта Гинецей шалфея
лекарственного (Salvia officinalis L.) 1,2,3,4,5,8 и 10-го года жизни
производственной посадки, а также на модельных растениях в экспериментах.
Опыты заложены на открытых участках, в экологически выровненных условиях на
общем агротехническом фоне. Уход за растениями в течение всех лет исследований
был одинаковым.
2.1. Объекты и методы исследований
Для проведения работы по изучению морфо-биологических особенностей и
хозяйственно-ценных признаков шалфея лекарственного были применены полевые
опыты в комплексе с лабораторными исследованиями.
Исследования проводилиcь по общепринятым методикам. Посевные качества семян
определяли согласно “Методическим указаниям по семеноведению интродуцентов”
[91]. Семена проращивали в чашках Петри на влажной фильтровальной бумаге при
температуре 5, 10, 15, 20, 25 и 300С (в трехкратной повторности по 100 семян в
каждой).
Для определения массы 1000 семян пользовались международными правилами [44],
согласно которым брали 8 проб по 100 штук. Исследования процессов прорастания
включало: выяснение условий прорастания семян при проращивании в лабораторных
условиях и при посеве в грунт (сроков посева, глубины заделки семян, сроков
хранения семян); изучение всхожести семян (процент и энергия прорастания).
Изучение ритмов роста и развития проводили методом фенологических наблюдений
[89] на 25 модельных растениях по методике И.Н.Бейдеман (1974 г.), с некоторыми
изменениями и дополнениями применительно к культуре [13]. В течение
вегетационного периода у растений отмечали следующие фенологические фазы:
всходы (первая пара настоящих листьев, третья пара настоящих листьев),
вегетационный рост, бутонизация, цветение (начало, массовое, конец),
плодоношение, конец вегетации, второе отрастание.
Биометрические измерения производили в течение всего периода вегетации один
раз в декаду. Измеряли высоту и диаметр растений, количество и длину побегов
всех порядков ветвления.
Для изучения этапов морфогенеза применяли метод морфофизиологического анализа
растений [67]. Исследовали верхушечные вегетативные и генеративные органы.
Пробы брали с десяти модельных растений каждые 10 дней в течение вегетационного
периода (в период роста побегов, одновременно с биометрическими измерениями).
Свежесобранный материал исследовали одновременно с препарированием почек под
лупой бинокуляра МБС-2. Семенную продуктивность определяли по методу
Т.А.Работнова (1950) [132] и методическим указаниям по семеноведению
интродуцентов (1980) [91].
Биологические особенности цветения исследовали согласно методических
рекомендаций по изучению антэкологических особенностей цветковых растений [89].
Динамика цветения изучалась ежедневно. Вели наблюдения за продолжительностью
цветения отдельно цветка, соцветия и растения в целом. При этом производился
подсчет зацветших и увядших цветков, фиксировалось время раскрытия и увядания
венчика. Период цветения цветка определяли, начиная с момента раскрытия цветка
и до начала увядания венчика. Работу проводили в полевых условиях методом
подсчетов.
Урожай сырья учитывали путем дробного поделяночного учета каждого образца в
фазе массового цветения растений по методике полевых опытов Б.А.Доспехова [42].
Сырье срезали вручную и сразу же взвешивали. Учет поражений вредителями и
болезнями проводили в соответствии с методикой селекции эфиромасличных
культур.
Анатомические исследования проводили на свежесобранных образцах с помощью
световых микроскопов МБС-2, JENAMED. Размер эфиромасличных железок измеряли с
помощью окулярмикрометра (цена деления 7,8 мкм) под микроскопом JENAMED, при
увеличении окуляра 8х, объектива 40х.
Массовую долю эфирного масла в растениях определяли методом гидродистилляции по
А.С.Гинзбергу [28] на аппаратах Клевенджера и пересчитывали на абсолютно сухую
массу растительного сырья.
Компонентный состав эфирного масла исследовали методом высокоэффективной
газожидкостной хроматоргафии [113, 125, 35] на кварцевых капиллярных колонках с
жидкими фазами Carbowax-20М и SE-30 (30 м, вн. lиам.0,25 мм). Условия анализа:
500С, 3 град/мин. Для идентификации индивидуальных терпеноидов использовали
метод индексов удерживания, а также метод добавок чистых веществ и смесей
известного химического состава. Данные подвергались статистической обработке с
вычислением среднего арифметического значения, стандартного отклонения,
дисперсии, коэффициента вариации при уровне доверительной вероятности р>0,95.
Статистическая обработка полученных результатов проведена методом
корреляционного, регрессионного, многофакторного регрессионного анализов на ЭВМ
[3, 46, 86].
2.2. Условия проведения исследований
2.2.1. Почвы опытного участка. Общий рельеф места проведения исследований
представляет возвышенно-балочную волнистую равнину. Грунтовые воды на глубине
более 10-12 м. Почва – чернозем предгорный мицелярно-карбонатный легкоглинистый
плантажированный слабо-скелетный на красно-бурых плиоценовых глинах [49, 128].
Данный тип чернозема характеризуется следующим морфологическим строением:
Горизонт А – 0-30 см. Темно-серый с буроватым оттенком, сухой
тяжелосуглинистый. Структура комковато-порошковидная. Переход в нижележащий
горизонт заметен по окраске и сложению. Имеются отдельные включения гальки и
хряща.
Горизонт В1 – 30-60 см. Серовато-буры
- Київ+380960830922