РАЗДЕЛ 2
ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКИХ НАБЛЮДЕНИЙ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы экспериментальных исследований
Экспериментальная часть работы проводилась в отделе клинических и экспериментальных методов исследования Института неотложной и восстановительной хирургии им. В.К.Гусака.
Экспериментальная часть работы проведена с целью выявления механизма нарушения сократительной функции тонкой и толстой кишки в динамике развития перитонита, определения взаимосвязи нарушения моторики тонкой и толстой кишки, а также изучения ответной реакции кишечника на различную стимуляцию.
В эксперименте изучалась двигательная активность тонкой и толстой кишок после операции и в динамике развития калового перитонита у 15 беспородных собак. Полученные результаты исследования анализировали, сравнивая две группы экспериментальных животных (умерших-6 (40 %), выживших-9 (60 %)). Результаты исследований моторной функции различных отделов кишечника, полученные после спектральной обработки сигналов моторной активности, зарегистрированы с помощью компьютерной техники (механоэнтероколограммы).
Экспериментальные исследования проводились в соответствии с национальными "Общими этическими принципами экспериментов на животных", которые согласуются с положениями "Европейской конвенции о защите позвоночных животных, использующихся для экспериментальных и других научных целей" [58].
Опыты на животных проводились под общим наркозом.
Анестезиологическое пособие проводилось по следующей схеме: для премедикации внутримышечно вводился атропин (0,01 мг/кг) и ветранквил (1 мг/кг). Путем венесекции устанавливался катетер в периферическую вену, для вводного наркоза использовался 1 % р-р тиопентала натрия (10 мг/кг) до достижения III стадии наркоза по Гведелу (миоз, выход третьего века до 2/3). При этом не допускалось апноэ, на самостоятельном дыхании производилась интубация трахеи трубкой с манжеткой. Вводили деполяризующие миорелаксанты: дитилин (0,05 мг/кг, в дальнейшем - 0,5-0,8 мг/кг в час). ИВЛ проводилась аппаратом РО-6-03 в режиме нормовентиляции из расчета 200-250 мл на кг в мин., с частотой 14-16 вдохов в минуту. Анестезия поддерживалась дробным введением фентанила (0,04 мкг/кг в час) и кетамина (5 мг/кг в час). Во время анестезии осуществлялся кардиомониторинг прибором ЭКСП-03, контроль АД, ЧСС. Вводились кристаллоиды из расчета 20мл на кг в час, поступление наркозных средств прекращалось за 20-30 минут до окончания операции. После восстановления адекватного самостоятельного дыхания ИВЛ прекращалась. По восстановлению тонуса мышц ротоглотки животное экстубировалось.
После введения животных в хирургическую стадию наркоза их фиксировали к операционному столу, выбривали операционное поле. Затем дважды обрабатывали 5 %-ным раствором йода и однократно 70 %-ным раствором этилового спирта. Далее обкладывали операционное поле стерильными простынями, выполняли верхнесрединную лапаротомию, фиксировали брюшину к операционному белью зажимами Микулича.
Выполняли лапаротомию, выводили подвесную илеостому отступя от слепой кишки 15 см и колостому на уровне с/3 толстой кишки, без пересечения задней стенки кишок. Запись моторики из тонкой и толстой кишки осуществлялась из датчиков давления (баллон и открытый катетер) при введении в просвет кишок через илео- и колостому. Первая запись моторики производилась сразу после операции и через 12 часов и в дальнейшем через каждые 12 часов утром и вечером в течение 11 дней. На 12-е сутки после лапаротомии и выведения илео- и колостомы создавали экспериментальный каловый перитонит путем введения в брюшную полость 30 % каловой взвеси 1 мл/кг. Во всех наблюдениях после введения взвеси в брюшную полость, собаки становились беспокойными, начинали скулить, практически у всех собак появлялись рвотные движения. Из 15 собак шесть умерли: одна собака через день после создания экспериментального перитонита, 4 собаки на 3-е сутки и одна собака на 4-е сутки после введения каловой взвеси. У остальных девяти собак перитонит разрешился.
При изучении фоновой и стимуляционной моторики кишечника у экспериментальных животных использовался метод проксимальной селективной баллонографии. Для этого использовалось комплексное физиологическое устройство, состоящее из системы датчиков:
- зонд универсальный (внешний диаметр 2,5 мм) длиной 2 метра с закрепленным на конце латексным баллончиком объемом 2 мл;
- блок дифференциации и преобразования - предназначен для разделения суммарного давления в просвете кишки, состоящего из давления стенки и внутриполостного давления, на отдельные компоненты и преобразования их в электрические сигналы;
- блок питания преобразователей давления;
- блок регистрации, предназначенный для многоканальной непрерывной записи измеряемых параметров.
Данное устройство позволяет воспринимать и регистрировать из одного и того же участка ЖКТ следующие физиологические параметры: ВПД, давление стенки исследуемого органа, ПЧСК и порог возбудимости стенки кишки (ПВСК) по силе тока.
Комплексное устройство является многоканальным и состоит из нескольких узлов, блоков и приборов, связанных между собой с помощью пневматических линий и электрических соединений кабелей.
Для электростимуляции моторики кишечника активные электроды фиксировали на поверхности баллончика, регистрирующего моторику исследуемого отдела кишечника. Индифферентный электрод - свинцовая пластина 6х8 см - закреплена на спине животного. Под пластину подкладывали марлю, смоченную в изотоническом растворе натрия хлорида.
Датчик вводился в илео- и колостому в приводящие их отделы. Величина калибровочного сигнала составляла 1см - 20 мм водного столба. Скорость движения ленты - 0,5 см/сек. Условия проведения записи были стандартными в одно и то же время. Длительность фоновой записи в среднем 40 минут, после чего применяли дозированную механическую, электрическую или фармакологическую стимуляц