РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Бактерії, поживні середовища, імунобіологічні препарати, хімічні реактиви,
лабораторні прилади і пристрої, використані при проведенні досліджень
В роботі було використано: 58 штамів бактерій виду Rahnella aquatilis, 28
штамів - Pragia fontium, 32 штами Budvicia aquatica. Вказані штами рахнел,
прагій і будвіцій мали таке походження: 4 референтних штами R. aquatilis (в
тому числі типовий штам АТСС – American Type Culture Collection 33071) отримані
від Dr. Odile Berge із Equipe d’ecologie microbienne de la rhizosphere (EMIR),
Center de pedologie biologique, UPR 6831 du CNRS, associee a l’Universite Nancy
I (BP 5, F-54501 Vandoeuvre-les-Nancy CEDEX, Франція) [236], а 54 - виділені
автором в 1993-1997 роках на території України (із них - 25 штамів ізольовані
із об’єктів оточуючого середовища, а 29 – із зразків клінічного матеріалу від
хворих та клінічно здорових людей); 10 референтних штамів P. fontium (в тому
числі типовий штам CNCTC – Czechoslovak National Collection of Type Cultures
Eb11/82) [2, 3] та 10 референтних штамів B. aquatica (в тому числі, типовий
штам CNCTC Eb13/82) [141, 161] отримані від Dr. Eva Aldova із National
Institute of Public Health (100 42 Praha, 10, Srobarova, 48, Чехія), а 18
штамів прагій (16 із об’єктів оточуючого середовища і 2 із зразків клінічного
матеріалу від людей) та 22 штами будвіцій (19 - із об’єктів оточуючого
середовища і 3 - із зразків клінічного матеріалу від людей) були виділені
автором в 1995-1997 роках на території України.
Референтний штам Klebsiella pneumoniae 22-110, який є хазяїном господарем
кон’югативної плазміди pAlz 60 і характеризується високим рівнем антилізоцимної
активності, отриманий від завідуючого лабораторією генетики вірулентності
бактерій, д-ра мед. наук, професора В.М. Бондаренко із НДІ епідеміології і
мікробіології імені Н.Ф. Гамалеї РАМН (вул. Гамалеї, 18, м. Москва, 123098, РФ)
[126].
Штами-донори стандартних плазмідних векторів (репліконів) LT2, pRK229, pBR322,
pUC18, pQE і реципієнтний штам E. coli K12 HB-101 отримані від С.В. Шагуна із
ТОВ “БіоАналітичні технології“ (вул. Пушкінська 79/1, м. Харків, 61002,
Україна).
Крім того, при проведенні різних досліджень, нами було використано 540 штамів
25-ти видів родини Enterobacteriaceae та 98 штамів бактерій інших таксономічних
груп (Bacteroides, Bifidobacterium, Lactobacillus, Enterococcus,
Staphylococcus, Micrococcus, Pseudomonas, Listeria). Вказані штами були
отримані із колекцій мікроорганізмів бактеріологічної лабораторії СЕС Південної
залізниці (м. Харків), лабораторії нових та маловивчених інфекційних
захворювань (ЛНМІЗ) Державної установи “Інститут мікробіології та імунології
імені І.І. Мечникова АМН України” (ДУ “ІМІ ім. І.І. Мечникова АМН України”), а
також із музею мікроорганізмів ДУ “ІМІ ім. І.І. Мечникова АМН України”.
Вирощування R. aquatilis, P. fontium і B. aquatica проводили на простих
поживних середовищах: 2%-ий м’ясо-пептонний агар (МПА) і м’ясо-пептонний
бульйон (МПБ) виробництва НАН України ІБОНХ Державного експериментального
заводу медичних препаратів (м. Київ). Для виділення штамів рахнел, прагій,
будвіцій із об’єктів оточуючого середовища і клінічного матеріалу та при
вивченні культурально-морфологічних властивостей цих мікроорганізмів
використовували комерційні елективні і селективні агарові середовища: Ендо, ЕМС
(агар із еозин-метиленовим синім), ВСА (вісмут-сульфіт агар), Плоскірєва,
лужний агар (ЛА) виробництва НВО “Питательные среды” (м. Махачкала, РФ). В
якості середовищ накопичування застосовували бульйони: магнієвий, селенітовий,
жовчний (середовище Рапопорт), глюкозний, 1%-ву пептонну воду, стерильну воду
із водогону (рН=6,9-7,1) [75, 79, 135]. Для визначення біохімічних
характеристик штамів рахнел, прагій, будвіцій та інших видів ентеробактерій
використовували диференційно-діагностичні середовища із цукрами, спиртами,
амінокислотами та іншими інгредієнтами з позначками “РЕАХИМ” виробництва
Шосткінського заводу хімреактивів, Київського заводу “РИАП”, Центру хімічних
досліджень “САН” (Словакія), фірм “Raanal” (Угорщина), науково-виробничої фірми
“СИНБИАС” (Україна). Диференційно-діагностичні середовища виготовлялись в ЛНМІЗ
за нормативно визначеними для цих мікроорганізмів рецептурами [75, 79, 135].
При розробці методу мікробіологічної (лабораторної) діагностики захворювань,
спричинених R. aquatilis, також застосовували набори “А” і “Б” систем
індикаторних паперових для ідентифікації мікроорганізмів родини
Enterobacteriaceae (“СИБ”- системы индикаторные бумажные), Горьківського НДІ
епідеміології і мікробіології МОЗ РФ та “ЭНТЕРО-тесты 1, 2” для диференціації
кишкових бактерій ВО “LaСhema” (Чехія). При визначенні чутливості
мікроорганізмів до дії антибіотиків використовували агар АГВ виробництва НАН
України ІБОНХ Державного експериментального заводу медичних препаратів (м.
Київ). Інші агаризовані середовища готували із використанням агарової основи
фірм “Difco” (США) і “Oxoid” (Великобританія). Хімічні реактиви з кваліфікацією
не нижче ЧДА, ХЧ: солі, кислоти, луги з позначкою “РЕАХИМ” виробництва
Славногорського хімзаводу імені Г.С. Верещагіна (РФ), Новочеркаського заводу
синтетичних продуктів (РФ), Олайського заводу хімреактивів (РФ), фірм “LaСhema”
(Чехія), “Sigma Chemical Co.” (США), “СИНБИАС” (Україна).
Для визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків застосовували
стандартні диски виробництва ВО “Мосмедпрепараты” імені Л.Я. Карпова (РФ).
При вивченні факторів патогенності у штамів R. aquatilis були використані такі
імунобіологічні препарати: цитра
- Київ+380960830922